大一学习计划书样例十一篇

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篇1

我们学生会的就是为大家提供服务的，为了更好的服务于每一位同学，为了更好的完成办公室的每一项任务，为了让自己的大学生活过得更充实更加有意义，为了以后更好的服务社会，为了适应这个充满竞争的社会，我将践行“争取想做的，做到该做的，做好在做的”这一座右铭，对自己严格要求，认认真真，踏踏实实的完成领导交给的每一项任务。经过接下来的努力学习及工作生活总结，努力使自己成为一名优秀的学生会办公室委员。

二 主要工作任务

1、对每周一次的例会做好通知、记录，做好上传下达的工作，并且落实例会的决定

2、多学、多看、多思，多悟，在例会中有不懂的地方，及时请教主任和同事。

3、在课余时间，积极主动地到办公室，辅助老师的工作，做一些力所能及的事情，认真履行自己的职责。

4、 协助各部门开展工作，协调部门之间的关系。

5、定期了解各部门工作进程，期末交学生会主席团，由此形成学生会工作总结，并以此作为部门考核内容之一。

6、负责文件处理。接收、传阅、督办上级团，学习组织文件、外来信函材料等;起草、印发学生会文件、总结汇报材料和对外信函等;做好文件管理、档案(含电子档案)和信息工作，对档案资料等文件，做到不遗失，查阅方便、迅速。

7、认真完成主席团交给的其它工作任务。

8、对办公室的重新布置与美化，处理办公室日常事务。

9、及时申请系团委学生会的办公用品，并且在最短时间内发放到各部。

10、对每次活动进行考勤，建立起一套完整的档案管理机制，建立起每个学生会部门、每个干事的考勤档案制度，确保学生会的各项评优、评奖活动有据可依。

11、对系团委学生会内部成员的档案管理将进行调整。

12、收集各部门的工作计划与工作总结，交于团委老师，审查后存档。

13、妥善保管好各部门、各项活动的计划、总结以及相关系团委学生会的所有资料，做好期末存档工作。

14、做好学生会各项活动的记录。

三常规工作

1：在工作的过程中，在做好我们的基本职能的前提下，我们应该更坚守我们的原则，规范自身，以身作则，认真的对待工作，我们需要加强仔细程度，及时上传下达，将信息传递给每个人，这是我们的工作与责任。

2：在办公室举行的活动中，我们需要具体动作创新，在保持传统活动精神的前提下，对活动的内容、形式、运作要有所创新，有所突破，很多活动如果再这样发展下去将毫无生命力，每个活动都包括前、中、后三个阶段：前期活动的策划;中期活动的举行，后期活动的总结。在活动前期一定要认真的做好详细的活动调查，调查对象主要包括校内大学生、学校党政机关和校外社会企业，并对活动的可行性进行评估分析。抓好活动精髓，提高活动立意，在我们本着为同学们创造学习环境、建设锻炼平台，提供表现机会的同时，更有必要在活动精髓及活动立意深思熟虑。要真正做到举办活动有意义，有收获，体现广大学生的需求，实实在在的为同学们提供服务，体现活动真正的价值，总而言之，价值体现在需求。整合现有资源的同时，可以根据实际情况，扩大活动规模，提高活动的意义。

四、学习管理理念

1、社会高速发展，为了赶上发展，学校管理制度也在迅速发展。所以作为系学生会咽喉部门的办公室会本着“一切服务于学生”为宗旨，做到快速的服务，确保学生工作的顺利进行。

2、“友情是人生的一次宝贵的财富”它将使我们的工作更加顺利，使我们之间更加团结和统一。

篇2

主办单位：**师范大学团委

承办单位：**师范大学青年志愿者指导中心

活动主题：用笔尖肆意挥洒，尽显当代大学生风采

活动目的：通过征文的形式，为热爱文学的同学们提供一个学习交流、展现自我风采的大舞台，让自信青春的同学们来传播精彩。

活动准备：

1、宣传部联系校广播站、师大报、传播人等校内影响力较大的媒体，协助我们共同宣传此次征文活动。

2、下发“‘托起梦想，激扬青春’系列征文比赛”文件给各个学院，由班级宣传委员通知到每位同学。

活动排期：

奖项设置：

奖品设置：

1、所有奖项均有奖状，金、银、铜奖全场大奖均有奖金，优秀奖均有纪念品。

2、金奖奖金300元、银奖奖金200元、铜奖奖金100元。

注奖励办法依据本期策略单，若有调整，解释权归广告社所有。

注意事项：

1、参赛作品必须原创，不得抄袭，一经发现抄袭现象，立即取消比赛资格，并在学校内通告批评。

3、所有参赛作品概不退还。主办单位有权对参赛作品巡展、结集出版、。

4、最后附有报名表。

活动经费预算：

奖金：1000元

纪念品：50元

奖状：10元

总计：1060元。

**师范大学青年志愿者指导中心策划部

附二心理咨询活动策划

活动时间：11月16日至11月18日

活动地点：青年文化广场

活动对象：**师大在校大学生

主办单位：**师范大学团委

承办单位：**师范大学青年志愿者指导中心

活动背景：

篇3

文章编号：1009-5519（2008）07-0954-03 中图分类号：R33 文献标识码：A

Study of soybean isoflavones on antioxidative effect and improving the ability of study and memory in climacteric rats

WANG Ai-mei1，ZHOU Jian-hui2，OUYANG Jing-ping1

（1.Medical College of Wuhan University，Hubei 430000，China；2.Nanyang Medical College of Henan，Henan 473058，China）

【Abstract】Objective：To investigate the influence of soybean isoflavones on the antioxidative effect and improving the ability of study and memory in climacteric rats.Methods：Forty-eight female SD climacteric rats were randomly divided into 4 groups with one control group and the other low，medium and high dose groups，which were given soybean isoflavones 0 mg/kg.bw，42 mg/kg.bw，83 mg/kg.bw and 249 mg/kg.bw by superalimentation daily for 60 days respectively.The levels of SOD，GSH-Px and MDA in serum were measured，and the ability of study and memory in each group was deterimined by adopting the law of diving platform.Results：The content of serum MDA in medium and high dose groups was lower than that in control group.The activity of serum GSH-Px im medium and high dose groups was significantly increased，so was the activity of serum SOD in low，medium and high dose groups.Conclusion：Soybean isoflavones do have the obvious effect of antioxidation，and improve the ability of study and memory effectively in female SD climacteric rats.

【Key words】Soybean isoflavon；Climacteric rat；Antioxidation；Study and memory

近年来国内外对大豆成分进行了广泛的研究，发现大豆皂甙具有抗氧化、降血脂等作用[1，2]；大豆异黄酮能有效预防癌症、骨质疏松等多种疾病的发生[3]。大豆异黄酮对更年期雌性大鼠抗氧化作用及学习记忆的影响少见报道，本研究采用更年期雌性大鼠，观察大豆异黄酮的抗氧化作用及对学习记忆能力的影响，为进一步开发利用提供科学依据。

1 材料和方法

1.1 样品：大豆异黄酮由西施兰联合企业有限公司生产、送检，样品为淡黄色粉末，胶囊，铝塑板装0.5 g/粒，每日1粒，按60kg体重计人体推荐量为8. 3 mg/(d・kg)，取胶囊内容物为样品受试物。

1.2 试验动物及饲料：清洁级雌性SD大鼠48只，12月龄，体重300～500 g由河南省实验动物中心提供（合格证号：4104035）；清洁级饲料由河南省实验动物中心提供（合格证号：4104042）。

1.3 主要试剂及仪器：SOD、MDA、GSH-PX试剂盒由南京建成生物工程研究所提供、美国产SPACE全自动生化分析仪、大鼠跳台系中国医学科学院药物研究所研制。

1.4 动物分组及剂量设计

1.4.1 剂量：根据大鼠血清中丙二醛(MDA)的含量的多少随机将更年期雌性SD大鼠分为分成4组，分别为空白对照组，低、中、高剂量3个实验组。低、中、高3个剂量组，分别为人体推荐量的5倍、10倍、30倍，即42 mg/kg、83 mg/kg、249 mg/kg，受试物采用灌胃法给予，分别取样品42 mg、83 mg、249 mg加蒸馏水至100 ml作为低剂量组、中剂量组和高剂量组的灌胃液。另设1个对照组仅给予蒸馏水，连续给予受试物2个月，灌胃量为l0ml/kg。

1.5 实验方法和观察指标：连续给予大鼠受试物2个月后，采血并分离血清，测定MDA含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH－PX)的活力。

1.6 大鼠学习记忆能力测定（跳台法）：跳台装置为80 cm×16 cm×40 cm的被动回避反应箱，箱底铺有铜栅作为刺激电极，内设高4.5 cm，直径6.5 cm的橡皮垫作为大鼠回避电击的安全平台。先放入大鼠适应5 min，随后通以36 V交流电，大鼠遭到电击后跳上安全平台，如从台上跳下，双足接触铜栅为错误反应，记录3 min内出现的错误反应数，作为学习测试成绩，24 h后重复上述试验，记录每只大鼠第一次跳下安全区的时间(潜伏期) 和错误次数，作为记忆测试成绩。

1．7 数据处理：实验数据用x±s表示，采用t检验判定组间差别。

2 结果

2.1 大豆异黄酮对大鼠体重的影响，见表1。

由表1可见，各剂量组大鼠在实验初期、中期和最后的体重分别与对照组比较，差异无显著意义(P>0.05)。说明大豆异黄酮在本试验条件下对动物的体重无明显影响。

2.2 大豆异黄酮对大鼠抗氧化作用的影响，见表2。

由表2可见，3个剂量组血清中的MDA含量均低于对照组，低、中、高剂量组与对照组比较差异有显著意义(P

2.3 大豆异黄酮对大鼠学习记忆能力的影响，见表3。

由表3可见，在跳台实验学习记忆测试中，低、中、高剂量组与对照组比较均能使更年期雌性大鼠的潜伏期延长，错误次数减少(P

3 讨论

自由基是指含有未配对电子的原子、分子或基团，由于自由基中含有未成对电子、具有强烈的配对倾向、高度活跃、很不稳定，具有极强的攻击性和破坏性。在正常情况下，体内不断产生自由基，但并未对身体造成严重后果，原因是机体的氧化和抗氧化系统存在着一种动态平衡。当机体受到损伤时，体内活性氧自由基增多，脂质过氧化反应加剧；当体内抗氧化能力增强，抗氧化酶活性增高时，可阻止脂质过氧化或降低脂质过氧化产物的含量。正常机体抗氧化系统的抗氧化酶类有SOD、GSH-Px等，SOD能将组织细胞中的超氧阴离子自由基歧化生成过氧化氢，从而减少氧自由基对细胞的损伤； GSH-Px是机体存在的一种含硒清除自由基和抑制自由基反应的酶系统，可将过氧化氢分解，并可清除 MDA和其它过氧化产物，阻止体内自由基引起的膜脂质过氧化。体内大量活性氧自由基若不能及时清除，使活性氧水平发生改变，可促发脂质过氧化反应。脂质过氧化产物（如MDA）可损伤组织细胞的膜性结构，影响膜的功能，从而导致组织细胞功能的损伤，作为脂质过氧化反应的产物，MDA能直接反映体内自由基损伤情况[4]。现已明确许多疾病或症状，如肿瘤、炎症、心脑缺血、动脉粥样硬化等，都与自由基有关[5]。

本实验结果显示: 大豆异黄酮明显降低更年期雌性大鼠血清MDA含量，提高血清SOD和GSH－PX活性， 并有效提高更年期雌性大鼠的学习记忆能力。提示大豆异黄酮能促进机体内源性抗氧化物质的产生，抑制MDA生成，具有明显的抗氧化作用。其抗氧化机制主要通过清除活性氧自由基，阻止脂质过氧化物的产生，提高抗氧化酶活性而发挥抗氧化作用。

更年期妇女随着卵巢功能的衰退、促性腺水平紊乱以及雌激素水平下降，导致脂质过氧化作用增强，自由基清除酶活性下降从而引起心血管疾病、老年痴呆等一系列的疾病[6]。更年期女性因雌激素水平低下而引起的一系列症状过去用传统的雌激素替代疗法（ERT）来治疗，但ERT会增加患雌激素相关疾病、特别是乳腺癌的风险[7]。大豆异黄酮是从大豆中提取一种天然植物雌激素，具有天然性和安全性，既可替代合成雌激素，又能避免因长期服用合成雌激素而导致的多种不良作用，因此大豆异黄酮一定具有良好的应用前景。

参考文献：

[1] Aoki H，Otake Y，Igaraquat K，et al.Soy protein reducesparaquat induced oxidative stress in rats[J].J Nutr，2002，132(8): 2258.

[2] Yamakoshi J，Izumi T.Isoflavone aglycone-rich extract withoutsoy protein attenuates atherosclerosis development in cholesterol-fed rab-bits[J].J Nutr，2000，130(8)：1887.

[3] 刘 丽，金 宏.大豆异黄酮抗氧化作用的研究进展[J].中华放射医学与防护杂志，2003，23(2):132.

[4] 李国莉.大豆异黄酮抗氧化效能的研究[J].食品科学，2005，26（10）：211.

[5] 郑灵芝，李素霞，袁勤生.大豆异黄酮抗氧化性质的研究[J].食品与药品，2006，8（2）：48.

篇4

在我国能源发展“十一五”规划中明确指出，要优化发展火电，具有更高参数、更高效率的超临界、超超临界机组如雨后春笋一般发展开来，依据电力行业标准《火力发电厂锅炉化学清洗导则》（DL/T794-2012）的相关要求，这些锅炉在基建时及运行一定年限后都应进行化学清洗。文章将介绍锅炉化学清洗的必要性，并重点阐述大容量、高参数机组锅炉化学清洗中应该注意的几个问题，提升化学清洗质量。

1 锅炉化学清洗的目的和必要性

锅炉的化学清洗，就是用某些化学药品的水溶液来清除锅炉水汽系统中的各种沉积物，并使金属表面形成一层良好的耐蚀防腐保护层。

随着锅炉参数和容量的日益增高，对受热面清洁度和锅内水质的要求更加严格。在现代锅炉机组中，机械去垢已不可能，加之近年来化学清洗工艺也日益完善，是使受热面内表面清洁、防止受热面因腐蚀和结垢引起事故的必要措施，同时也是节能降耗、提高锅炉热效率、改善机组水汽品质的有效措施之一。其直接或间接的重要意义在于如下几个方面：

1.1 提高换热效率，节能降耗

通过化学清洗，可有效地去除沉积在锅炉热力设备表面的导热系数很低的垢层，极大地提高了锅炉的换热效率，从而达到节约能源、降低煤耗的目的。

1.2 延长锅炉的使用寿命

由于结垢使导热性能下降，管壁温度升高，局部过热可产生爆裂、爆炸，导致事故，对锅炉进行化学清洗可降低管壁温度，有效避免爆管事故，延长设备使用寿命。另外，沉积物下的金属容易进一步腐蚀，清除沉积可减缓设备机体的腐蚀，延长使用寿命。

1.3 减少经济损失，取得更大效益

无论是提高换热效率，节能降耗，还是延长设备使用寿命，化学清洗的最终目的都是为了取得更大的经济效益。

2 针对大容量、高参数机组自身的特点，化学清洗过程中应注意问题的探讨

2.1 化学清洗各部位流速控制

由于超临界、超超临界机组锅炉各部位通流面积相差大，导致各部位清洗流速不一致。如某电厂锅炉为北京巴布科克・威尔科克斯有限公司生产的超超临界参数、变压运行直流炉，一次中间再热、单炉膛平衡通风、露天布置、固态排渣、全钢构架、全悬吊结构Π型锅炉，其省煤器、水冷壁规格、通流面积如表1：

从表1可以看出：该锅炉省煤器通流面积为水冷壁的3倍多，为确保各部位的清洗流速满足清洗要求，在清洗泵的选择上要兼顾各个部位，在确保省煤器流速满足要求的同时也要防止水冷壁流速过高。

2.2 重点关注后墙水冷壁化学清洗期间温度，防止偏流现象发生

由于一些超临界、超超临界机组锅炉水冷壁垂直段后墙结构复杂，如某电厂锅炉为超临界参数变压直流炉，其后墙水冷壁就包括了后水冷壁前屏和水平烟道前部侧包墙等，大大增加了后墙的流通阻力，如图1。

在化学清洗过程中，由于清洗流速较运行时低很多，从而导致后墙容易发生偏流，因此要求我们在清洗过程中应加强后墙温度监测，必要时采取临时措施，优化系统设计，单独接一路临时管至后墙水冷壁集箱，加大后墙流量，确保后墙清洗流速满足要求。

2.3 选取垢量最大的管样进行小型试验，确定最佳化学清洗工艺

工艺选择时应有针对性，特别是对运行炉，其结垢致密、成分复杂，清洗前应进行小型实验，确定最佳清洗工艺。化学清洗前应根据锅炉实际燃烧情况和水冷壁发生故障的历史记录，选择多个部位割管，并比较垢量。以垢量最大的管样进行小型试验，确定清洗方案。

现大型锅炉化学清洗常用的清洗介质有EDTA、柠檬酸、羟基乙酸和甲酸等。EDTA清洗系统简单，对金属的腐蚀性较小，清洗液能在金属表面生成良好的防腐保护膜，可以清洗和钝化一步完成，清洗水量及废液量少，但不宜清洗含硅量高的水垢。柠檬酸对Fe3+有良好的络合性能，但酸洗液中铁含量过高和溶液pH值>4时，易产生柠檬酸铁垢的沉淀，影响酸洗效果。

篇5

【Abstract】 Objective To investigate the Tetramethylpyrazine (TMP)mediating antiproliferation effect，and define its molecular mechanism in cultured rat aortic vascular smooth muscle cells (VSMC). Methods Cultured cells proliferating model of rats VSMC were established by plateletderived growth factor (PDGF). Cultured cells were randomly pided into three groups: control， PDGF (20 ng/ml)and TMP treatment (20， 40， 80 μmol/L) groups. The number of VSMC were accounted under microscope. The expression of intercellular adhesion molecular1 (ICAM1) and integrinlinked kinase (ILK) were analyzed by Western blotting respectively. Results The proliferation of rat VSMC induced by PDGF could be inhibited by TMP significantly in a dosedependent manner. A remarkable decrease of ICAM1 and ILK expression were demonstrated in the TMP group compared with the PDGF group.Conclusions The antiproliferation effect of TMP associates with suppression of adhesive molecules.

【Key words】 TMP;Adhesive molecules;Signal transduction;Vascular smooth muscle cells (VSMC);Rat

川芎嗪是从具有活血化瘀作用的中药川芎中分离得到的一种生物碱，化学组分为四甲基吡嗪，目前已在临床上广泛用于心脑血管疾病的治疗。我们前期研究证明，川芎嗪通过作用于血管平滑肌细胞(VSMC)而发挥活血化瘀的作用〔1〕，但缺乏在分子水平上阐明其机制的研究。细胞间黏附分子(ICAM)是一类介导细胞与细胞间或细胞与细胞外基质间相互作用的膜表面糖蛋白，在单核细胞及血小板的黏附聚集过程中发挥着重要的作用，与细胞增殖密切相关〔2〕。本研究用血小板源性生长因子(PDGF)刺激体外培养的大鼠VSMC复制细胞异常增殖模型，从抑制黏附分子信号传递角度探讨川芎嗪抗VSMC增殖的机制，为从分子水平上阐明其活血化瘀作用机制提供实验依据，明确其作用靶点。

1 材料与方法

1.1 材料 健康雄性5周龄SD大鼠，体重(100±10)g，由河北省实验动物中心提供。川芎嗪注射液 (40 mg/2 ml)由北京第四制药厂提供。DMEM培养基、胎牛血清FBS由Gibco公司提供。PDGF、小鼠抗ICAM1单克隆抗体、小鼠抗整合素耦联激酶(ILK)单克隆抗体、兔抗GAPDH单克隆抗体、HRP标记的羊抗小鼠IgG二抗、发光试剂等均购自美国Santa Cruz公司。其他化学试剂均为进口或国产分析纯。

1.2 VSMC的培养 5周龄雄性SD大鼠用25%乌拉坦按照0.4 ml/100 g体重进行腹腔注射麻醉，于无菌条件下取大鼠的胸腹主动脉。用0.01 mol/L PBS洗净管腔内血液并剥脱血管外膜后，按贴块法分离培养VSMC。待细胞爬满培养瓶底后，用0.25%胰蛋白酶消化传代。倒置显微镜下观察细胞形态及生长情况，用光镜及免疫组化的方法进行细胞鉴定。取3～6代细胞进行实验。

1.3 细胞分组 取传代培养的VSMC接种于细胞培养瓶中。待VSMC在含10%胎牛血清的DMEM培养液中生长至60%～70%融合时，换无血清培养基饥饿培养24 h，使细胞同步化于静止期。实验随机分为对照组、PDGF刺激组和川芎嗪组。对照组单纯加入培养液5 ml;PDGF刺激组添加PDGF使其终浓度为20 ng/ml;川芎嗪组先用不同浓度 (20、40、80 μmol/L) 的川芎嗪注射液预孵育1 h，然后再加PDGF(20 ng/ml) 刺激24 h。收集各组细胞进行实验。

1.4 Western印迹分析 提取各组细胞的蛋白，用改良的Lowry法测定浓度。取各组等量蛋白提取液经8% SDSPAGE电泳分离后，半干式电转至PVDF膜上，5%脱脂奶粉封闭，分别与鼠抗ICAM1单克隆抗体 (1∶300)、ILK单克隆抗体(1∶400) 在4℃条件下封闭反应过夜。用HRP标记的羊抗兔IgG二抗(1∶10 000) 室温反应2 h，经TTBS、TBS充分洗涤后采用化学发光法显影。用美国Kodark公司ID数码成像分析系统分析结果。

1.5 统计学处理 采用SPSS10.0 统计软件包处理，数据以x±s表示，多样本均数比较采用单因素方差分析，组间均数比较采用t检验。

2 结 果

2.1 川芎嗪呈剂量依赖性抑制VSMC的增殖 细胞计数后发现，与对照组比较，PDGF刺激组细胞数量显著增多，增加约3.8倍。20 μmol/L川芎嗪实验组对细胞数目增加的抑制作用不明显，40 μmol/L川芎嗪组具有抑制细胞数量的作用，此时细胞数量约为PDGF刺激组的48%(P

2.2 川芎嗪抑制ICAM1的表达 Western印迹结果经过灰度值对比处理后发现，正常对照组ICAM1的灰度值表达量很小，PDGF刺激组ICAM1的表达量显著增加。川芎嗪组ICAM1的表达量与刺激组相比明显减少，仅相当于其的44%(P

2.3 川芎嗪抑制ILK的表达 Western印迹结果显示，对照组仅有少量ILK表达;PDGF刺激组ILK的表达量明显增加。川芎嗪组ILK的表达量虽然仍旧比对照组多，但与PDGF刺激组相比降低明显，仅相当于其62%(P

3 讨 论

川芎嗪是伞形科植物川芎的主要成分，具有活血化瘀的作用，因可与其他中药组成方剂，故广泛应用于心脑血管疾病的救治。大量研究表明川芎嗪可抑制VSMC的异常增殖，但对其确切的分子机制目前尚不很清楚。现已明确，动脉粥样硬化等血管增殖性疾病的主要病变特征是血管平滑肌细胞向内膜下迁移与增殖、血小板的黏附聚集、单核/巨噬细胞浸润等，黏附分子及其受体的相互作用是引发这一系列慢性炎症过程的主要生物学机制。因此，如何抑制黏附分子的表达或阻断其功能已经成为研制抗血管增殖性疾病的新靶标〔3〕。

单核细胞在血管内皮黏附并向内皮下迁移和泡沫化被认为是动脉粥样硬化的早期病理过程。ICAM1是单链跨膜糖蛋白，属免疫球蛋白超家族成员，分子量为80～110 kD，其受体为整合素家族的黏附分子白细胞功能相关抗原1(LFA1)。已经发现ICAM1/LFA1的相互作用在淋巴细胞与内皮细胞的相互作用、淋巴细胞介导的细胞毒反应过程中具有至关重要的作用〔4〕。ICAM1可分布于白细胞、内皮细胞、平滑肌细胞及某些肿瘤细胞上，正常情况下很少或不表达，在炎症、内皮损伤等病理生理条件下表达增加，从而促进炎症的发生与发展〔5〕。所以阻断黏附分子的作用可能会抑制细胞的迁移与增殖。本研究结果显示，对照组ICAM1很少表达，这可能是由于此时 VSMC 正处于分化状态不具有增殖活性，PDGF刺激组由于细胞异常增生活跃，故 ICAM1 的表达量明显增多，川芎嗪组 ICAM1 的表达量与比PDGF刺激组相比显著减少，提示川芎嗪可能通过抑制ICAM1的表达而发挥抗VSMC增殖的作用。

ILK是1996年Hannigan等〔6〕用酵母双杂交的方法研究整合素β1结合蛋白的过程中被发现的。它具有Ser/Thr蛋白激酶结构，是一个59 kD的细胞内信号蛋白，广泛分布于多种细胞中，对黏附分子信号跨膜转导至细胞内起者关键性的介导作用。ILK可以与整合素β1、β2、β3亚基胞浆区域及细胞骨架相关蛋白结合，以依赖于PI3K的方式被激活。活化后的ILK可以磷酸化蛋白激酶B (PKB) 的Ser473和糖原合成酶激酶3 (GSK3)，进而发挥生物学效应。ILK在调节细胞黏附与生长、肿瘤形成等过程中均起重要作用，是保证黏附信号进一步向下游传递的重要调节分子。为了探讨川芎嗪抑制ICAM1表达的生物学意义，本研究进一步观察了ILK在增殖细胞中的表达变化。Western印迹结果显示，作为黏附分子信号传递关键性调节激酶的ILK在各个实验组中的变化趋势与ICAM1的改变基本相同。以上结果提示，川芎嗪可能通过下调ILK的表达得以阻断细胞黏附与迁移的信号在VSMC内的传递;通过减少ICAM1的表达减弱炎细胞的黏附与聚集，从而削弱局部的炎症反应，起到抑制细胞异常增殖的作用。

总之，本研究结果提示川芎嗪可逆转由PDGF刺激导致的VSMC异常增殖，其分子机制与阻断黏附分子信号传递、抑制黏附分子表达有关。由于中药具有多层次多靶点作用的特点，川芎嗪是否还通过其他途径抑制VSMC异常增殖还需做进一步的探讨。

参考文献

1 狄柯坪，常立功.川芎嗪对家兔肠系膜微血管运动的作用机理与一氧化氮的关系〔J〕.中成药，2003;25(1)：4951.

2 高 岩，夏 蕾，白 明.实验性大鼠肺血栓栓塞症中ICAM1，P选择素的变化及当归注射液的影响〔J〕.中国微循环，2007;11(3)：1769.

3 Shimizu N，Suzuki H， Wakabayashi K，et al.Expression of intercellular adhesion molecule1 and vascular cell adhesion molecule1 in the pig coronary artery injury model：comparison of plain old balloon angioplasty and stent implantation〔J〕.J Cardiol，2004;43(3)：1319.

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中图分类号：G40文献标识码：A文章编号：1674-2117（2014）12-00-01

1 新技术的引入

目前，对网页上数学公式的编辑问题通常采用以下解决方案：通过图片显示和通过（数学公式标记语言）显示数学公式。需要在符合要求的浏览器中才可以显示，但占市场主流的IE浏览器等都不具备符合的条件。这几种技术对于数学类网络答疑和考试系统来说都不太方便。笔者使用的网络在线公式编辑工具和网络在线图形编辑工具全面支持公式和图形的在线输入与编辑，支撑在线复制、粘贴与修改数学公式和所编图形的强大功能；并且客户端不需要安装相应插件，突破了网络辅导答疑系统中数学公式输入的技术瓶颈，界面如下图所示。

由于这种新技术刚刚出现不久，尚未在各种答疑系统和考试系统中得到广泛的应用。本文旨在借助这两种先进的技术对我校的数学课程网络辅导答疑与考试系统进行一体化设计与应用。更好地为教师和学生服务，为国家精品资源共享课建设奠定基础。

2 建立实用性强的网络辅导答疑系统模块

我们已经对该系统做了初步的研究，如下图所示。

目前该系统的功能还不是十分完善。在后续研究中，本系统将增加章节索引功能和搜索功能：章节索引功能可以使学生快速定位自己的问题所在，实现先学习再提问的目的；搜索功能将帮助学生快速查找本系统是不是已经存在和自己相似的问题，且该搜索功能将全面支持公式的搜索。我们力争引入和推广MathQ学习交互的软件，MathQ软件就像我们的QQ一样，能够实现在线交流功能，包括点对点的和群组之间的。

3 建立功能齐全的在线考试系统模块

我校轻工学院已经试用了一套在线考试平台，如右图所示。该系统已经成功实现了在线考试和成绩收集功能。在此基础上进一步完善功能，使该系统支持课程在线作业、训练测试与在线考试模式，支持成绩统计分析与试卷分析，在线测试包含考点设置、试题建设等测试题库建设功能，同时支持从网络试题库的试卷库中导入试卷来测试。通过在线测试系统，教师根据学生的每次测试成绩，可以给出其一个发展性的评价，及时掌握学生的学习动态，并调整教学计划与安排，最终能够获得一个良好的教学效果。

本研究将新技术应用到数学课程网络辅导答疑与考试系统中，由于系统内集成基于Web的公式编辑和图形编辑器，从而支持各数学专业学科知识的在线交互、在线答疑和在线考试，完成了数学学科知识的在线交互。网络辅导答疑系统彻底地解决了公式和图形的在线编辑问题，提高了答疑工作的便捷性与及时性，增加了师生之间和学生之间的互动性，激发了学生的学习兴趣，提高了教学质量。在实际教学中，在线考试系统完善了教学模式的转变，使其总结性评价的教学模式向发展性评价的教学模式顺利过渡。网络辅导答疑系统不仅减轻了教师负担，让其有更多的时间用于对学生的辅导和答疑，而且加强了学生的学习效果与自主学习能力，更加科学、公平、合理地评价学生。

参考文献:

[1]赵晓青等. 大学数学课程网络教学系统建设的探讨[J]. 石家庄铁路职业技术学院学报, 2005.

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[中图分类号] r-33 [文献标识码] a [文章编号] 1674-4721（2013）05（c）-0016-03

老年性痴呆亦称阿尔茨海默病（alzheimer' s disease，ad），它是一种极其常见的中枢神经系统退行性疾病，由于病因及发病机制至今不清，发病以后很难治愈，给患者的日常生活也带来了很大的不便。ad患者脑内含有大量的以异常过度磷酸化的tau蛋白为主要成分的神经元纤维缠结（nfts）[1]，有研究[2]发现ad患者的痴呆程度与神经原纤维的缠结数目具有密切的关系，而神经原纤维增粗扭曲形成缠结正意味着神经元趋于死亡，因此也可以验证出ad患者的痴呆程度与神经原纤维的缠结数目是呈正相关[3]趋势增长的说法。所以可以大胆地推断海马tau蛋白的过度磷酸化其实就是ad的核心原因。而电针治疗通过电流微弱的刺激大鼠海马区域，以此来增强其活性，通过激活磷酸酯酶活性，来限制ad患者脑tau蛋白异常过度磷酸化，从而进一步改善ad的发病症状。此实验初步探究电针刺激大鼠海马区，旨在证明电针能改善ad大鼠的记忆能力，抑制tau蛋白异常过度磷酸化，进而延缓ad的发展并改善其症状。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康的sd雄性大鼠60只，体重180～200 g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供（批号：2010002）。在实验室稳定条件下饲养1周。

1.2 主要试剂及仪器

戊巴比妥钠（上海索莱宝生物科技有限公司）；ab25-35（美国chemicon公司）；tau-5单克隆抗体、tau-1单克隆抗体、p-tau（s396）多克隆抗体（biosource公司）；脑立体定位仪（narishige sn-2型）；morris水迷宫（北京硕林苑科技有限公司）；全能脉冲电疗仪（6805-c型）（汕头市医用设备厂有限公司）；无菌针灸针（北京健乐康医疗器械有限公司）。

1.3 动物造模

将大鼠称重并用4%戊巴比妥钠进行腹腔麻醉注射之后，将大鼠固定在大鼠脑立体定位仪上，并且可以参照《大鼠脑立体定位图谱》先对大鼠进行最常规的消毒，然后切口于颅顶正中矢状，将骨膜分离，用锥颅器快速钻开颅骨，使硬脑膜完全暴露出来。于前囟1.3 mm，矢状缝左右旁开1.6 mm，垂直3.5 mm，用微量注射器对每侧侧脑室各注射aβ25-35（实验前将其溶于0.9%氯化钠溶液中，配置成浓度10%）。用微量注射器将aβ25-35在3 min内缓慢注入，留针5 min，充分浸润局部组织，缓慢拔出微量注射器。第3天重复注射试剂，剂量相同，正常组不用注射药品。

1.4 分组和治疗

将雄性sd大鼠30只随机分成正常组、模型组和电针组，每组10只。电针组：第2次水迷宫测试结束后，用毫针针刺“百会”穴，平刺约2.5 mm，“大椎”穴，直刺约4 mm。“百会”穴、“大椎”穴连接6805-c型全能脉冲电疗仪，频率为30 hz，电压为2 v，强度是以肢体轻微抖动为宜，用针刺大鼠双侧“太溪”穴，双侧“肾俞”穴，直刺进针5 mm，双侧 “足三里”穴，直刺进针4 mm，间歇5 min捻转一次，每日1次，时间40 min。7 d为1个疗程，间歇1 d，治疗3个疗程后进行行为学测试。正常组：给予正规的饲养，模型组：造模后常规饲养。

1.5 morris水迷宫测试

迷宫水池中的平台位于东北象限正中，水面高出平台100 cm，将大鼠面向池壁分别从4个入水点放入水中，记录其在2 min内寻找到并爬上平台的时间即逃避潜伏期。潜伏期最长时间120 s。分别在治疗前后进行游泳实验

，大鼠每次在2 min内寻找到并爬上平台的时间为大鼠的记忆成绩，每日2次，连续5 d，然后计算出测试结果的平均成绩。

1.6 检测大鼠海马tau蛋白含量

第2次大鼠进行水迷宫试验结束后，将其断头取脑，分离双侧海马，放入冰箱中冷冻保存，用western blot法来检测大鼠海马区tau蛋白的含量。在1 ml组织裂解液匀浆中加入双侧海马，等待离心5 min后提取上层清液，并利用考马斯亮蓝法进行蛋白浓度的测定，将各组所得蛋白调整成等浓度的溶液样品。等量蛋白样品经过10% sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后，转移到pvdf膜封闭2个小时，加入一抗（tau-5检测tau蛋白总量，tau-1检测198位点非磷酸化tau蛋白，s396 tau检测404位点磷酸化tau蛋白），孵育过夜，洗膜3次，加入二抗室温孵育2 h，洗膜13次。凝胶成像仪拍摄图像，image j软件测定平均光密度（od）值。

1.7 统计学分析

采用spss 17.0统计软件分析包，进行单因素方差分析，组间比较用t检验，统计结果以x±s表示，p < 0.05为差异有统计学意义。

2.1 各组大鼠morris水迷宫试验逃避潜伏期比较

治疗前模型组和电针组的时间延长与正常组比较差异有统计学意义（均p < 0.05），治疗后模型组大鼠的逃避潜伏期的平均值相对于正常组和电针组的时间长，差异有统计学意义（均p < 0.05）。见表1。

2.2 各组大鼠海马tau蛋白含量比较

tau-5蛋白3组间的含量差异无统计学意义，与模型组相比电针组海马tau-1含量明显偏高，但是s396 tau蛋白的含量却明显比模型组（均p < 0.05）低很多，s396 tau蛋白含量及电针组海马tau-1的含量与正常组相比，它们之间的差异无统计学意义。见表2。

3 讨论

老年性痴呆又称阿尔茨海默病（alzheimer's disease，ad），是中枢神经系统（cns）退行性疾病。患者中最具特征性的神经病理改变就是神经元内出现大量的神经原纤维缠结，神经原纤维缠结（nft）多出现在海马、皮质以及基底前脑的神经元中，其病理特征为大脑皮质及海马等处的老年斑（sp）和nft[4]。在ad患者中，其病理条件下，tau蛋白会不断的发生异常过度磷酸化的改变，因此会丧失与微管相互结合的能力，而且这些磷酸化的蛋白会聚集在一起并形成 nft（也就是说会使大量的神经元纤维缠结），结果会导致微管解聚，破坏了细胞的正常骨架，更会损坏正常轴突的转运系统，由此导致了突触丢失并引发退行性的病理改变。而神经原纤维缠结主要是由双股螺旋纤维构成的，tau蛋白过度磷酸化会形成各种各样的同分异构体，这些异构体正是双股螺旋纤维的主要成分，细胞之中tau蛋白过度磷酸化是ad最早出现的病理改变之一[5]。有关的最新研究表明[6-8]，关于aβ所导致的失忆和生理行为的缺陷，其实都是依赖于tau蛋白分子所具有的独特功能。因此，怎样预防并改善tau蛋白过度磷酸化是现代化科学对ad病理学研究的关键性所在。

tau蛋白是在1975年weingarten等在采用猪脑分离纯化微管蛋白的同时，被首次分离出来的一种与微管的组装具有密切关系的含磷糖蛋白。它能使微管的功能和结构维持正常稳定的基础，而且它的功能也受到磷酸化水平调节，tau蛋白构象改变的主要原因之一就是其过度磷酸化所导致的，它也会因此丧失促微管组装的生物学活性及功能，而且对蛋白水解酶的抗性增加，会产生神经毒性[9-11]，进而危害机体健康。tau蛋白在ad患者脑内磷酸化程度高出正常人3～4倍。在ad患者的大脑内存在3种tau蛋白，一是细胞质正常tau蛋白（c-tau），二是过度磷酸化易溶型tau蛋白（adp-tau），第三种是聚集成phf的tau蛋白（phf-tau）。到目前为止，在phf-tau中已经鉴定出45个磷酸化位点[12]，其中主要是苏氨酸和丝氨酸残基发生过度磷酸化，本实验是在丝氨酸的198和404位点展开进行的。电针通过对大鼠海马区的刺激，来增强细胞活性，通过激活磷酸酯酶活性，来限制ad患者脑tau蛋白异常过度磷酸化，从而进一步改善ad的发病症状。

祖国医学认为，脑为髓海、精明之府，肾藏精，生髓，通于脑，髓由肾中精气化生。《素问·宣明五气篇》曰：“肾藏志。”志，即为记忆、学习能力。清·林佩琴《类证治裁》曰：“夫人之神宅于心，心之精根于肾，而脑为元神之府，精髓之海，实记忆之所凭也。”说明肾中如若精气充盈，则神清气朗，耳聪目明。由此用“百会”“大椎”“太溪”“肾俞”“足三里”组成针灸治

疗，通过影响中枢神经系统，能抗氧化，以及改善突触形态可塑性及长时程增强效应，来直接或间接提高ad大鼠的学习记忆能力[13-15]。本实验结果显示，针能减低aβ所致的tau蛋白在198和404位点磷酸化水平，提示电针治疗有一定的抑制tau蛋白磷酸化的作用，这将有助于神经元微管系统的稳定，起到保护神经元的作用。

[参考文献]

[1] 王建枝. tau蛋白基因突变与神经退行性疾病[j]. 生命的化学，1999，19（6）：288-290.

[2] lee vm，balin bj，otvos l，et al. a68：amajor subunitofpairedhelical filaments and derivatized forms of normal tau[j]. science，1991，251：675.

[3] braak h. neuroanatomy of alzheimer diseaes[j]. alzheimers research，1997，33：235-247.

[4] 万章. tau蛋白过度磷酸化在阿尔茨海默病发病机制中的作用[j]. 医学研究生学报，2010，23（5）：539-542.

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中图分类号：G42 文献标识码：A 文章编号：1005-5312（2012）05-0238-01

教育的根本任务在于“育人”。所谓“育人”就是要促进个体的身心发展，实现个体的社会化。不论是基础教育还是高等教育，都应把全面提高青年一代的文化素质作为首要目标。而作为文化摇篮的高等学府，更应把构建人文修养和人文精神作为最基本的职能。

加强文化素质教育的探索与实践，是我国高等教育教育思想和观念改革的“催化剂”。在提高人才的整体素质的过程中具有重要的基础性的地位和作用。艺术教育作为人文教育之中坚,其发挥的作用不可低估。但遗憾的是，很多高校都陷入了“智育第一”的误区，长期忽视学生全面素质，特别是人文素质的培养，艺术教育依然只是专业教育的“点缀”。大家普遍认为，艺术教育只适合艺术类或文科学生，学理工的去学艺术没有任何意义，这是教育的功力倾向和实用主义不断蔓延泛滥的结果。事实上，专业教育只是全面发展教育的一项内容，它虽然对拓宽人的认识、启迪人的智慧等方面有重要作用，但主要功能还是使学生获得专门的知识和技能。如果大学生只重视可以带来实际效益的专业知识的学习，而轻视艺术修养方面的教育和熏陶，学校只重视智育不重视人文教育，教师只教书不教人，这种情况，长此以往，将会造成人类素质和文明的倒退，必将引发很严重的社会问题。

所以，艺术教育应该是面向全体学生的审美教育,它通过情感、形象、审美等教育活动,引导学生进行艺术鉴赏与表现,提升自己的文化品位与创新思维能力，而创新思维能力，就是理工科学生应具备的必不可少的能力之一。理工科学生主要运用抽象思维，忽略了人的情感作用，而艺术范畴则侧重形象思维。如果能把抽象思维与形象思维完美的结合起来，便可如虎添翼。从古至今，许多科学家不仅在自己的学科领域卓有成就，而且在人文科学、艺术方面也具有良好的修养。说“音乐成就了爱因斯坦”这话一点不为过。 读过爱因斯坦传记的人，也许都不会轻易忘记这位科学巨匠的另一种生活：他常常陶醉在美妙的旋律中，并在美的和谐中触摸宇宙的“神经”。当他体验到演奏莫扎特的奏鸣曲所带来的那种无法言喻的快乐时，音乐就成为他一生的至爱。用莫斯考夫斯基的话说，扶摇直上的巴赫音乐使爱因斯坦不仅联想到耸入云端的哥特式教堂的结构形状，而且还联想到数学结构的严密逻辑。弹钢琴，是爱因斯坦工作之后的消遣，亦是他工作之前的娱乐或激励。当然，爱因斯坦不是为娱乐而娱乐，而是借助音乐深入那个“广漠无垠的宇宙”，获得超个人的体验。有时，一支乐曲进行到途中，爱因斯坦会突然停下，也许是一段优美的旋律触动了灵感，爱因斯坦又开始了他的科学独白。量子论创始人普朗克家也弹得一手好钢琴，他常与爱因斯坦一起演奏贝多芬的作品。这两位理论物理学大师心心相印，无论在科学领域，还是在艺术领域，他们都用亲密的“语言”互相交流，共同描绘一幅壮丽的蓝图。还有我国著名的地质学家李四光，他年少时就喜欢音乐，小提琴也拉的很不错，并且他还是中国第一首小提琴的作曲者，早在1920年，他在巴黎的时候就创作了小提琴独奏曲《行路难》，全曲有头有尾，层次清晰，最难能可贵的是乐曲立意深邃。毫无疑问，音乐是他们心灵的天堂，他们可以随时摒弃人世间的一切喧嚣，自由自在地漫步于美妙的音乐王国，沉浸于浪漫的遐思和深邃的思想之中。

可以说，音乐是作为一种精神催化剂，悄然渗透到这些科学家的思维中去的。他们对事物有着卓越的直觉能力，这种令人叹为观止的直觉能力，实则与艺术家的想象有异曲同工之妙,所以他们可以被称之为“科学的艺术家”。 诚如郭沫若对科技工作者的忠告：“科学也需要创造，需要幻想，有了幻想才能打破传统的束缚，才能发展科学”。所以在大学生文化素质提高与完善的重要时期，尽管学生所学专业不同，都应有选择地开设艺术课，让他们接受良好的艺术教育。

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The expression and intervention of medicion of heme oxygenase．1/CO in idiopathic pulmonary fibrosis of rats BAO Wen．hua，SHI Feng，XING Ji．qiang.Department of Pulmonary Medicine， The First Affiliated Hospital of Jiamusi University．Jiamusi，Heilongjiang Province 154002，China

【Abstract】 Objective To investigate the expression and intervention of medicion of heme oxygenase．1/CO in idiopathic pulmonary fibrosis.To offer new method for early diagmosis and therapy of idiopathic pulmonary fibrosis.Methods 60healty wistar rats was divided into four groups randormly.Discern for:nornal control group、idiopathic pulmonary fibrosis group、the group of specific stimulator of HO．1,the group of specific inhibitorof HO．1．Measured the levels of HO．1 activity and COHb in blood and lung tissues of each group，to analyze effection of HO．1/CO，and influence of medinces in idiopathic pulmonary fibrosis.Results HO．1and COHb was expressd very lowly in blood and lung tissues,and there was not association between HO．1 expression and COHb expression(P>0．05).In idiopathic pulmonary fibrosis group，group of specific stimulator and the group of specific inhibitor，HO．1 expression and COHb expression in blood and lung tissues was higher than the goup of control， and there was significant association between HO．1 expression and COHb expression(P

【Key words】 Idiopathic pulmonary fibrosis；Bleomycin；Hemin； SnPP； HO．1；CO

肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)是由于过多的成纤维细胞聚集和细胞外的基质成分沉积而导致正常的肺组织结构改变和功能丧失的一类疾病。血红素氧合酶(heme oxygenase,HO)是哺乳动物组织细胞微粒体的一种蛋白酶,催化血红素产生胆绿素、一氧化碳(CO)和亚铁，研究[1]提示气道平滑肌中存在HO．1和HO．2,HO．1主要是被一些因素诱导产生,包括缺氧、应激等。Prabhakar[2]等的研究表明，通常HO．1的表达很低甚至缺乏,但在应激和缺氧情况下明显提高，肺纤维化可使机体处于缺氧状态，故推测可使HO．1的表达增加，体内COHb生成增多，利用大鼠肺纤维化模型和应用HO．1的特异性激动剂和抑制剂，研究HO．1/CO在肺纤维化大鼠中的表达及药物干预的影响，为临床肺纤维化治疗提供一种新方法。

1 材料与方法

1．1 材料 应用佳木斯大学动物实验中心提供健康Wistar大鼠(黑动第99102001)60只,雌雄各半,体质量170~200 g,正铁血红素购自美国Sigma公司，锡原卟啉(SnPP)购自美国Sigma公司，博莱霉素(BLM．A5)购自黑龙江省哈尔滨博莱制药有限公司，UV．756MC型紫外可见分光光度计购自上海精密化学有限公司。

1．2 方法

1．2．1 模型制备 参考文献方法略做改进[3．4]，将大鼠麻醉，气管内注射博来霉素(BLM．A 5．5 mg/kg)0．2~0．3 ml，建立肺纤维化组模型，气管内注射等量的生理盐水建立对照组模型，在肺纤维化模型组基础上分别腹腔注射血晶素或锡原卟啉(125 μmol/kg)注射液0．5 ml/d，建立加强组与抑制组模型。

1．2．2 评价 病理学检查:在大鼠肺纤维化造模后第7、14、28 d,在每个实验组随机处死5只动物,分离肺脏,注入10%(体积分数)福尔马林液1．5 ml保持30 min后,投入Bouins液固定24 h,常规脱水,石蜡包埋后,切片(3 μm)，行苏木精．伊红(HE)和Mallorys三色染色。光镜下观察有无炎性反应及纤维化发生。评价是采取Szapiel等[5]定量或半定量方法。

1．2．3 观察指标

1．2．3．1 肺组织与血清中HO．1活性测定 将肺均浆上清液和血清各20 μl中加入2 mmol/L正铁血红素40 μl，4．5 mmol/L还原性辅酶Ⅱ40 μl，同一只健康豚鼠的肝组织匀浆上清液20 μl,0．1 mol/L的KH2PO4缓冲液(pH 7．4)1．8 ml，避光置37℃恒温水浴箱中，10 min后，将反应物棕色小瓶置于冰上终止反应。不含NADPH的样品做空白对照，在分光光度计上用464 nm和530 nm双波长测定胆红素生成量[2]

1．2．3．2 全血COHb含量测定：参照乐宏元等[6]的方法，新鲜血中加入保险粉(Na2S2O4)250 mg，使样品中多组分的血红蛋白转化为Hb和COHb两个组分，在UV．756MC型紫外可见分光光度计上用420 nm和432 nm两个波长测定吸光度，依比尔定律建立综合方程式求出全血COHb的百分含量。

1．3 统计学处理 实验数据以均数加标准差(x±s)表示，计数资料采用SPSS13．0软件进行t检验、相关性分析，计量资料采用秩和检验。

2 结果

2．1 大鼠肺组织形态学及病理学观察 在对照组中，第7、14、28天肺组织成淡红色，表面光滑，未见明显出血点，无明显炎性反应及纤维化的发生，且各时间段无明显变化。在肺纤维化组中，肺组织出现明显的出血水肿，并逐渐融合成片，形成斑片状、结节状纤维化，并随时间延长，肺纤维化组中炎性反应程度逐渐减轻，纤维化程度逐渐加重；加强组中，仅出现炎性反应性改变，无肺纤维化发生；抑制组中，肺纤维化程度较对照组、肺纤维化组及加强组最重，出现广泛的肺纤维化。

2．2 大鼠肺组织肺泡炎及纤维化程度 在正常对照组中仅可见少量轻度肺泡炎；在肺纤维化组中，造模后的第7天，出现广泛的肺泡炎，在第14天、28天组中，随着时间的延长，炎性反应逐渐减轻，肺纤维化程度逐渐加重，形成广泛的肺纤维化；激动剂组中，肺泡出现较轻的炎症改变，无肺纤维化形成；在抑制剂组中，肺纤维化程度最重，出现广泛的肺纤维化。

2．3 大鼠血清COHb水平变化 在激动剂组与纤维化组中，血清COHb水平随时间逐渐增加；在抑制剂组中血清COHb水平逐渐减少，各组比较见表1。

3 讨论

3．1 关于博来霉素致大鼠肺纤维化的动物模型 肺纤维化是一种慢性炎症性间质性肺疾病，主要表现为弥漫性肺泡炎、肺泡单位结构紊乱和肺纤维化病变，从起始症状到病情逐渐恶化，进而导致呼吸功能不全而死亡一般为3~5年，其病因尚不清楚，发病机制仍不明了。为了探讨HO．1/CO体系在大鼠肺纤维化中的表达及血晶素及锡原卟啉对其的干预，复制稳定的动物模型是本试验的根本保证。本试验对博来霉素导致大鼠肺纤维化进行了28 d的动态观察，包括整体病情、精神、饮食、活动能力、一般反应、体质量的变化以及肺组织病理学观察，结果显示本试验采用博来霉素致肺纤维化模型是成功而稳定的，与文献结果一致。

3．2 血红素氧合酶．1/一氧化碳与肺纤维化 血红素氧合酶(heme oxygenase,HO)是哺乳动物体内与亚铁血红素代谢相关的,一族具有多种功能的微粒体氧化酶，是血红素分解代谢的限速酶，由HO．1、HO．2和HO．3三种同工酶构成，其中HO．1为诱导型的血红素氧合酶，它广泛分布于全身组织细胞的微粒体内，其活性在多种因素的诱导下，约可提高100倍，是目前已知最易受诱导的酶之一。一氧化碳(CO)与一氧化氮(NO)一样，都是双原子、小分子气态物质，20世纪90年代初期CO受到广泛关注，研究结果证实，CO是一种重要的细胞信使分子，在细胞功能和通讯的调节中发挥信号转导作用，其在心血管、呼吸、神经、免疫和内分泌等系统中发挥着重要的生物学效应。

通过本实验研究发现，对照组肺组织与血清中HO．1含量与血清中COHb的含量均很少，且两者无明显相关性，在单纯肺纤维化组中其两者的含量明显增加，并成正相关发展(P

参考文献

1 McCoubrey WK,Huang TJ,Maines MD.Isolation and characterization of a cDNA from the rat brain that encodes hemoprotein heme oxygenase．3．European Journal of Biochemistry,1997,247:725．732.

2 Prabhakar N R，Dinerman JL，Agani FH，et al.Carbon monoxide:a role in carotidbody chemoreception.Proc Natl Acad Sci USA，1995，92(6):1994．1997.

3 Kai Zh,Mehrnaz GK，Bridget MC，et al.TNF．α mediated lung cytokine networking and eosinpphil recrucitment in pulmonary fibuosis.Immunology,1996,23:954．959.

4 李学军，崔社怀.三七总甙及甲泼尼龙对实验大鼠肺纤维化的干预作用及机制的初步探讨.中华结核与呼吸杂志，2002，25：520．523.

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中图分类号：R54文献标识码：A文章编号：1009_816X（2016）02_0104_05

doi：103969/jissn1009_816x20160208Inhibition on Homocysteine_induced_transformation of Rat Aortic Vascular Smooth Muscle Cells Phenotype by Yellow Rice Wine Polyphenols WU Qiu_de， GUO Hang_yuan， MENG Li_ping， et al Xidian Township Hostipal of Ninghai Country， Zhejiang 315600， China

[Abstract] Objective To verify the inhibition of yellow wine polyphenols on homocysteine（Hcy）_induced_transformation of rat aortic vascular smooth muscle cells（VSMCs） phenotype Methods Rat VSMCs in primary culture were identificated， and VSMCs in passage 4_7 were used for the following experiments The VSMCs were divided into 5 groups： control group， Hcy （100umol/L ） modulation group， Hcy+polyphenols modulation group， Hcy+alcohol modulation group， Hcy + yellow wine modulation group MTT were used to investigate the proliferation of VSMCs Transwell chambers and wound healing were employed to test the migratory ability of VSMCs ICC were used to detect the VSMCs’ morphology structure Western blotting were used to investigate the expressions of SM_actin， SM_MHC， Calponin and OPN in VSMCs of every group Results Compared with control group， the proliferation and migration ability of VSMCs were significantly increased in the Hcy modulation group （P

[Key words] Yellow wine polyphenol； Hcy； VSMCs； Smooth muscle cell phenotype transformation

血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）的增殖和迁移是动脉粥样硬化（AS）发展过程中重要的病理基础，也是造成支架植入或冠状动脉搭桥术后血管再狭窄的重要原因。最近研究显示血管平滑肌细胞在不同的分化阶段有不同的细胞表型，不同表型之间的平滑肌细胞生理特性相差巨大，并且在外界因素发生变化时，VSMCs不同表型之间可以相互转化。正常血管中的VSMCs一般是已分化的“收缩型”平滑肌细胞，在血管受到损伤时，一些已分化的“收缩型”VSMCs可以去分化成为“分泌型”细胞。“收缩型”VSMCs低增殖，低分泌，特异性表达平滑肌肌动蛋白（SMA）、calponin、平滑肌肌动蛋白主要组织相容性复合体（SM_MHC）等具有标志意义的特征性蛋白，“分泌型”VSMCs增殖加快，细胞外基质分泌增加，表达“收缩型”细胞所没有的骨桥蛋白（osteopontin，OPN）。现在大量的研究结果显示在粥样斑块中，“收缩型”的VSMCs减少，“分泌型”的VSMCs增多。同型半胱氨酸（Homocysteine，Hcy）是目前公认的冠状动脉粥样硬化的独立危险因素，我们前期的实验已经证实Hcy可以增强VSMCs的增殖和迁移，诱导VSMCs大量分泌基质金属蛋白酶（matrix Metalloproteinases，MMPs）等影响细胞外基质动态平衡的蛋白酶。国内王生兰等也通过试验证实Hcy可以促进大鼠血管平滑肌细胞的增殖和表型转化。过去的研究结果显示少量引用低浓度的黄酒可以显著减少LDLR-/-小鼠主动脉内粥样硬化斑块的面积，低浓度的黄酒还可以抑制大鼠血管内皮细胞和血管平滑肌细胞分泌MMP2。国外的大量研究已经证实红酒中主要是多酚类物质具有AS的作用，所以我们推测黄酒中的多酚类物质也具有抗AS的作用。

1材料与方法

11材料：（1）实验动物：SPF级SD大鼠，雌雄不限，50天左右，体重150g～180g（购自浙江省医学科学院实验动物中心）。（2）实验试剂：黄酒多酚（上海中药制药技术有限公司，国家中药制药工程技术研究中心），乙醚、甲醇、75%乙醇、95%乙醇、无水乙醇、甲醇（杭州化学试剂有限公司）、DMEM高糖培养基、PBS、025%胰蛋白酶_EDTA、青霉素和链霉素（杭州吉诺公司）、同型半胱氨酸（Sigma公司）、胎牛血清（GIBCO公司）、MTT（Emresco公司）、DAPI（Rcohe公司）、兔抗大鼠SM_actin单克隆抗体、兔抗Calponin、SM_MHC、OPN多克隆抗体（ABCOM公司）、辣根过氧化酶标记的山羊抗兔或者抗鼠二抗、FITC、FRITC标记的山羊抗兔IGg（jackson公司）、蛋白免疫印迹以及明胶酶谱相关试剂（江苏碧云天生物技术研究所）。

12VSMC原代细胞培养以及鉴定：采用组织贴块法培育大鼠胸主动脉VSMCs，采用形态学观察和细胞免疫荧光检测SMA鉴定VSMCs，通过SMA与DAPI核染之间的关系鉴定VSMCs的纯度。取第4～7代细胞用于后续实验，实验中细胞加干预因素时用含25%胎牛血清的培养基。

13分组及干预：细胞实验分为5组，分别为空白组（不加任何干预因素），Hcy组（浓度为100μmol/L，以001%DMSO为溶剂），黄酒多酚组（100μmol/L Hcy+50mg/L黄酒多酚，以001%DMSO为溶剂），酒精组（100μmol/L Hcy+15%酒精），黄酒组（100μmol/L Hcy+黄酒）。国内外文献报道DMSO终浓度

14MTT法测VSMCs增殖：取4～7代培养细胞，025%胰蛋白酶消化单层VSMCs，用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基配成细胞悬液并计数，以每孔6×103个细胞接种于96孔培养板中。待细胞贴壁后，无血清培养基培养24小时使细胞同步化。各组细胞按上述分组加入对应浓度的干预因子，每组设3个复孔，2个不加细胞的空白对照孔。细胞于37℃、5% CO2孵箱培养24小时、48小时和72小时。培养结束，每孔加入MTT液20μL，37℃继续孵育4～6小时，终止培养，小心弃去培养上清，每孔加入150μL DMSO，震荡10分钟，选择490nm波长于酶联免疫检测仪测定各孔吸光值并记录。以时间为横轴，吸光值为纵轴绘制VSMCs生长表。

15细胞划痕实验测VSMCs迁移：取4～7代培养细胞，025%胰蛋白酶消化单层VSMCs，用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基配成细胞悬液并计数，以每孔105个细胞接种于6孔培养板中，每孔体积2mL。细胞铺满板底后，无血清培养基培养24小时使细胞同步化，加入18mmol/L羟基脲作用12h抑制细胞增殖，用100μl黄色枪头垂直于孔板制造细胞划痕，吸去细胞培养液，用PBS冲洗孔板三次，洗去划痕产生的细胞碎片。加入各组相应的干预因子，拍照记录0、12、24、48、72、96小时图片，用image pro plus60分析计算出细胞迁移的面积（划痕面积减去迁移后细胞之间剩余面积），细胞迁移的面积与最开始的划痕面积之间的比值来表示迁移的多少。

16Transwell法测VSMCs迁移：取4～7代VSMCs，血清饥饿使细胞同步化，加入18mmol/L羟基脲作用12h抑制细胞增殖，025%胰蛋白酶消化单层VSMCs，用含有各组干预因子的DMEM高糖培养基（无血清）配成细胞悬液并计数（3×104个/ml）。各组24孔板配套的Transwell小室（08μm）上室加入200μl细胞悬液，下室加入含有10%胎牛血清的DMEM高糖培养基500μl，分别培养4小时、8小时、12小时、24小时、48小时。干预结束后以棉签轻轻擦去上层未穿透膜的VSMCs，取下Transwell半透膜，TBS洗涤3次，37%多聚甲醛室温固定5min，流水冲洗后，用2μg/ml的DAPI染核，PBS冲洗后，荧光显微镜下随机每组取5个视野计数穿膜细胞数并记录。

17细胞免疫荧光法检测各组中SM_actin在细胞中的分布及表达：将第4～7代细胞接种于96孔板，每孔3000～5000个细胞，待细胞贴壁后加入各组干预因子，在细胞融合之前进行检测。先PBS洗三遍，用4%多聚甲醛固定，025%Triton X 100穿破细胞膜，山羊血清室温封闭1h，加入稀释了250倍的anti_SMA抗体，4℃过夜，PBST清洗三遍之后加入结合有FICT或者FRICT的山羊抗兔二抗，室温孵育一小时后PBST清洗三遍，荧光显微镜拍照后图片用iamge pro plus 60分析。

18Western blot测定VSMCs中SM_actin、calponin、OPN的表达：各个干预因子干预48小时之后，裂解VSMCs提取蛋白，BCA法蛋白定量，SDS_PAGE胶每孔加入20μl样品，80V 30min进行蛋白浓聚，120V 2小时进行凝胶电泳，并用孔径045μm硝酸纤维素膜250mA 90min进行转膜。转膜完毕经常温下TBST洗膜x3、脱脂奶粉封闭2小时后，以1：1000浓度加入兔抗鼠SM_actin一抗（或抗calponin、SM_MHC、OPN、β_actin一抗），4℃孵育过夜，常温下TBST洗膜x3，辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗孵育后ECL化学发光法检测目标蛋白和内参。暗室柯达胶片显影，Quantity one软件定量分析。

19统计学处理：用SPSS200统计软件分析数据。实验数据以（x-±s）表示，多组均数比较用单因素方差分析，组间比较采用LSD法，P

2结果

21VSMCs原代培养及鉴定：用组织贴块法培养大鼠胸主动脉VSMCs，大概8天左右组织块周围有细胞爬出，两周左右细胞融合可以传代。传代后细胞呈典型“峰谷”状排列生长，用SM_actin细胞免疫荧光鉴定VSMCs，DAPI核染之后确定细胞纯度在99%以上，见图1。图1大鼠主动脉VSMCs形态学（×100）以及细胞免疫荧光鉴定（×400）22黄酒多酚和黄酒抑制Hcy诱导的VSMCs增殖：在加入各组干预因素后，12小时和24小时时各组OD值没有明显区别。相比于空白对照组，48小时之后Hcy组OD值明显升高（P

26Western blot检测各组细胞中SM_actin、calponin、SM_MHC、OPN的表达情况：各组VSMCs中SM_actin的表达量没有显著差异，相比于空白组，Hcy组VSMCs中OPN表达增加（P

在不同的外界因素影响下，VSMCs具有不同的细胞表型，具有很强的可塑性。在正常血管中膜中的VSMCs是一种高分化的细胞，细胞呈梭形，主要起维持血管形状和收缩血管的作用，具有低增殖、低迁移、低蛋白分泌等特征；当发生动脉粥样硬化等血管疾病时，VSMCs可以去分化为未分化的细胞，形态变圆，细胞收缩性能下降，表现出高增殖、高迁移、高蛋白分泌等特征。过去的观点是将VSMCs细胞表型单纯的分为“收缩型”和“分泌型”两种表型，现在大量的研究已经证实，在不同强度的外界因素作用下，VSMCs去分化的程度不同，可表现出各种介于“收缩”型与“分泌”型之间的细胞表型特征，从而在很多血管疾病的发生发展中发挥重要的作用。

自从1979年Chamley等第一次发现平滑肌细胞具有不同的细胞表型以来，目前已经发现了一大批特异性比较高的可以作为已分化成熟VSMCs标志的蛋白，比如与细胞收缩密切相关的SM_actin、calponin、SM_MHC、SM22α、smoothelin等蛋白以及参与细胞骨架构成的h_caldesmon、β_vinculin、telokin、metavinculin、desmin等蛋白。这些蛋白在分化成熟的VSMCs中表达，其表达量随着平滑肌细胞的去分化而逐渐减少，相反，最近的研究发现OPN和糖基质蛋白在去分化的VSMCs中开始表达，并且表达量跟细胞的去分化程度呈正相关。通过检测SMα_actin、SM_MHC、calponin、OPN等蛋白的表达情况是近几年来国内外研究者常用的鉴别VSMCs不同细胞表型的方法。

随着“法国悖论”以及“地中海饮食”等概念的提出，国内外大量的研究都证实规律适量的饮用红酒具有心血管保护作用并且已经阐明红酒的心血管保护作用主要是由于其中的多酚类成分。红酒多酚主要由儿茶素、花青素、白藜芦醇等组成，通过改善血管功能、调节血脂、调节特异性Micro RNA、抑制VSMCs增殖和迁移等作用而发挥心血管保护作用。绍兴黄酒由糯米发酵而成，也富含儿茶素、没食子酸等多酚类物质，我们前期的动物试验已经证实黄酒多酚具有抑制高脂饮食小鼠AS的作用和抑制Hcy诱导的VSMCs高表达MMPs等影响细胞外基质平衡的蛋白。在本实验中，我们进一步证明黄酒多酚具有抑制Hcy诱导的VSMCs表型转化的作用，这可能是多酚具有抗动脉粥样硬化作用的另一机制。

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篇11

[中图分类号] R574.62 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）07（a）-0037-03

感染性疾病在儿童疾病谱中仍占首要位置，在胃肠道感染疾病中，EPEC在发展中国家儿童中的发病率较高[1-2]，尤其是3岁以下的幼儿，且疾病的危害性大。在儿童胃肠感染性疾病中，近年来有关轮状病毒性腹泻疾病中CD4+T淋巴细胞亚群及其代表因子的研究较多，细菌性腹泻病例散发、不易收集，国内外文献关于细菌性腹泻病例的CD4+ T淋巴细胞亚群代表因子研究少有报道。Th1、Th2、Th17淋巴细胞是CD4+T淋巴细胞的三个亚群，在感染性疾病和免疫相关等疾病中发挥着重要作用。本研究以小鼠细菌感染性腹泻为疾病模型，探索小鼠经口感染EPEC后外周血浆中的Th1、Th2、Th17淋巴细胞代表因子水平的变化以了解小鼠的免疫反应特点。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 普通健康昆明小鼠40只，雌雄各半，体重18～22 g（5～6周龄，购自军事医学科学院实验动物中心，检验检疫合格），于军事医学科学院实验动物中心屏障实验室进行实验。将40只昆明小鼠随机分成生理盐水对照组（20只）和实验组（20只）。

1.1.2 主要实验试剂与仪器 致病性大肠杆菌（EPEC-E2348/69）（军事医学科学院实验动物中心惠赠），小鼠T淋巴细胞因子CBA组合试剂盒（BD美国），血细胞分析仪（NIHON KOHDEN日本），离心机（德国KENDRO公司），-80℃冰箱，涡旋混匀器（IKA公司），流式细胞仪（美国BD公司）。

1.2 感染性腹泻小鼠模型制备

1.2.1 实验组 所有小鼠均单笼饲养，实验前禁食24 h、禁水1 h。①实验开始前对每只小鼠进行眼眶静脉采血，放置于经EDTA钾盐溶液浸润过的容器中，留作血细胞分析。②给每只小鼠灌胃3%碳酸氢钠溶液0.3 mL。③配制浓度为5×108 cfu/mL的致病性大肠杆菌混悬液，灌胃碳酸氢钠溶液半小时后，对实验组每只小鼠灌入细菌混悬液0.5 mL；4.8 h后更换空鼠笼，不添加垫料，观察小鼠的大便性状。

1.2.2 对照组 对照组不作血常规检测，处理因素将致病性大肠杆菌混悬液更换为生理盐水0.5 mL，余处理过程同实验组。

1.2.3 实验中观察及检测指标 ①灌胃8 h后，观察小鼠的大便性状、精神状态、行动动作。②灌胃后第24小时，对实验组所有小鼠采血进行血细胞分析。小鼠精神萎靡、少动或激惹躁动，大便性状为黏液、稀便，血细胞分析白细胞计数结果差异有统计意义则视为造模成功。

1.3 感染性腹泻小鼠外周血T淋巴细胞因子检测

1.3.1 外周血采集及血浆分离 在第24小时对实验组、对照组小鼠行摘眼球法取血，取部分血行血细胞分析，余下经过离心10 min（3000 r/min，离心半径16.5 cm），收集血浆，冻存于-80℃冰箱中以备统一检测。

1.3.2 T淋巴细胞因子检测 上述血浆在37℃孵化箱中解冻， 细胞因子检测具体步骤按试剂盒说明书进行，经过流式细胞仪上机处理后可获得各细胞因子的荧光强度值，通过标准曲线换算成相应浓度（自动换算），结果以ng/L表示。

1.4 统计学方法

采用SPSS 18.0软件进行统计学分析，非正态分布及未知分布形态总体采用秩和检验Wilcoxon W检验，数据以M（P25，P75）中位数、四分位间距表示。以P < 0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 感染性腹泻小鼠模型的建立

细菌灌胃后约6 h小鼠出现倦怠、精神萎靡、行动迟缓，部分小鼠出现黏液便、稀便，部分小鼠出现松软大便（较正常粪便含水多）。灌胃前后分别取小鼠血液进行血细胞分析，结果表明实验组小鼠灌胃前后白细胞计数（WBC）水平差异有统计学意义（P < 0.05），中性粒细胞百分比（N%）、淋巴细胞百分比（L%）虽有改变，但差异无统计学意义（P = 0.076 > 0.05，P = 0.086 > 0.05）。见表1。

2.2 血浆中Th1、Th2、Th17淋巴细胞因子水平检测

实验组小鼠在胃肠感染后外周血浆中淋巴细胞因子：IL-2、IL-6、IL-10、IL-4、IL-17A较对照组水平升高，与对照组比较有统计学差异（P < 0.05）。TNF、IFN-γ两细胞因子水平与对照组比较差异无统计学意义（P > 0.05）。见表2。

3 讨论

有关动物细菌性腹泻模型的报道较少，主要是大肠杆菌诱导动物腹泻模型，且多为经腹腔注射诱导动物腹泻，但此类方式与传统的人类经口感染方式不同。本实验采用经口灌喂细菌感染小鼠，与传统的运用中草药及腹腔注射制作小鼠腹泻模型原理不同，模仿人类胃肠感染主要诱发途径（经口感染）。通过主观的观察指标（大便性状、行动动作）和客观实验数据（血细胞分析结果）分析判定小鼠感染，更能模拟人类肠道感染时状态。本次实验开始前采取禁食水以及灌胃碳酸氢钠溶液，目的是为了减少肠内容物及营养物、减少胃酸分泌 ，降低胃肠的屏障功能使得细菌得以存活继而繁殖、黏附，造成肠道组织损伤及其免疫反应以达到腹泻的效果。人类细菌感染一般情况下白细胞计数是升高的，但实验过程中小鼠白细胞计数表现为降低（重复两次），或许是重度感染所致，中性粒细胞及淋巴细胞百分比变化符合人类细菌感染时情况但差异无统计学意义，具体有待进一步研究（但考虑为唯一处理因素，且处理后有统计意义，处理有效）。

细菌肠道感染后，鼠模型的肠黏膜完整性及上皮细胞受损、细菌毒素侵入及局部体液分泌使小鼠出现黏液稀便、精神萎靡等炎性反应的表现，血细胞的组成比例也发生变化。肠道黏膜免疫系统和全身的免疫系统产生应答，有多个细胞因子参与，其中包括Th1类淋巴细胞代表因子：IL-2、TNF、IFN-γ，Th2类淋巴细胞代表因子：IL-6、IL-10、IL-4，Th17类淋巴细胞代表因子：IL-17A，它们在适应性免疫应答过程中起着重要作用。

有研究指出儿童感染性腹泻病发病时体内IL-6水平升高[3-4]，包括细菌性和病毒性腹泻，本实验小鼠在细菌感染后血液中IL-6水平也呈升高趋势。IL-6是多功能炎症细胞因子，升高后可促进B细胞增殖分化和分泌抗体，促进抗体与抗原（病原）结合进而清除病原。

IL-2在T细胞介导的细胞免疫应答中起到促进、维持T细胞活化增殖的重要作用，促进所有亚型T淋巴细胞活化增殖及产生细胞因子。IL-4促使活化的B淋巴细胞分泌IgE和IgG1，促进IgG向IgE类型转换，以自分泌方式促进Th2细胞分化但抑制Th1细胞增殖及其应答等，在变态反应疾病发病过程中有重要作用。关于IL-2、IL-4这两个因子在感染性腹泻病（尤其是细菌性）中少有报道，在一项旅行者腹泻研究中[5]诺瓦克病毒感染组IL-2、IFN-γ升高，主要由Th1细胞介导免疫反应，诺瓦克病毒和产毒性大肠杆菌混合组呈现Th1/Th2双重免疫反应。本研究提示IL-2、IL-4都高于正常对照组，IL-2在疾病过程中促进了各亚型T细胞活化，促进炎症的发展，IL-4的升高一定程度上抑制了Th1介导的免疫反应，同时也促进了Th2介导的免疫反应。

IL-10是一类重要的抑制性细胞因子，抑制IL-2、IFN-γ等促炎细胞因子产生，抑制Th1细胞应答。IL-10作为抗炎介质对脓毒症有一定保护作用，Florquin等[6-7]报道BALB/C小鼠经注射葡萄球菌肠毒素（SEB）4 h后血液中IL-10水平明显高于对照组，IL-10单抗可将SEB攻击小鼠的死亡率提高30%，该作用可被IFN-γ抗体抑制，IL-10是黏膜免疫应答的重要调节因子。本实验提示EPEC肠道感染小鼠血中IL-10水平升高，与上述研究结果类似，对炎症的放大和扩散起到限制作用，避免了炎性连锁反应及无限扩大，具有抑制全身炎性反应综合征、脓毒症的发生发展的作用。

IL-17A主要由Th17淋巴细胞产生，是重要的促炎因子，诱导炎症因子和趋化因子释放，如IL-6、IL-8等，募集、活化中性粒细胞并抑制其凋亡。在儿童感染性腹泻病研究中[8-9]，IL-17A参与疾病的免疫反应，且在迁延性感染中IL-17A水平高于急性期组和正常对照组。本次实验小鼠急性期出现感染性腹泻后IL-17A水平与对照组相比升高且有明显统计学差异，与报道不完全相同。IL-17A在急性期促进炎症反应，使机体产生免疫应答，但若长期高于正常水平存在将导致机体的慢性炎症或相关免疫性疾病发生。动物实验显示[10]，Th17细胞在肠道慢性炎症的维持中发挥重要作用，中和IL-17A后模型小鼠肠道炎症明显减轻。

本研究显示EPEC肠道感染模型中外周血TNF、IFN-γ水平均有不同程度升高，但与对照组比较无统计学差异。IL-2、IL-6、IL-17、TNF、IFN-γ为促炎因子，IL-4、IL-10为抗炎因子，但多个因子同时具有抗炎和促炎两种作用。本研究显示在出现胃肠道感染后，小鼠体内炎性反应并非单纯的促炎或抗炎细胞因子水平升高，也不是表现为单纯Th1类细胞因子或单纯Th2类细胞因子水平升高，呈现Th1/Th2混合免疫状态。虽然Th1细胞因子有一定程度升高，但IL-4以及IL-6、IL-10的明显升高表明在急性期以Th2细胞介导的体液免疫应答占优势，Th1/Th2下降，失衡的Th1/Th2是否能恢复、何时恢复、如何恢复有待进一步研究。如果调高的Th2、Th17细胞因子水平持续存在，那么推测EPEC肠道感染存在诱导慢性免疫性疾病的可能。

促炎因子反应过强则造成机体组织损伤加重，抗炎因子反应过强则对机体抗病原体免疫反应产生一定程度抑制效应，这种抑制效应在一定程度上能够减少或避免组织更大的损伤，但同时可造成慢性迁延性感染及相关免疫疾病的发生。促炎反应、抗炎反应、Th1/Th2细胞介导的反应是一个动态平衡过程，一旦失衡将导致相关疾病的产生如慢性炎症或免疫相关疾病。多种免疫相关性疾病与感染相关，可由感染直接或间接诱发，本研究表明EPEC肠道感染小鼠模型体内Th2、Th17细胞相关性淋巴因子增高为主，Th1/Th2降低，提示肠道细菌感染可能与某些病原体呼吸道感染[11]（合胞病毒等）一样，有增加变应性疾病发生的倾向。有关于非致病性大肠杆菌（Nonpathogenic E. coli ATCC 25922）抑制小鼠气道过敏疾病动物模型体内的特异性IgE、IL-4的水平的报道，且呈时间和剂量依赖性[12]，但本研究使用的是致病性大肠杆菌和健康小鼠，结果和研究方式有所不同。鉴于Th2、Th17细胞在变态反应性疾病发病机制中的重要作用，儿童感染性腹泻病（细菌感染）与变态反应疾病是否有一定相关性尚需进一步深入研究。

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