时间：2023-03-10 15:05:12
序论：速发表网结合其深厚的文秘经验，特别为您筛选了11篇救火事迹材料范文。如果您需要更多原创资料，欢迎随时与我们的客服老师联系，希望您能从中汲取灵感和知识！
据估计，全世界每年有2.2 万的骨科、神经外科及口腔科患者因骨缺损行骨移植手术。目前常见的骨移植材料有自体骨、同种异体骨、脱矿化骨基质、异种骨、合成材料、组织工程产品等。自从灭活骨、脱钙骨能够诱导异位骨再生的现象被发现以来，科学家们认识到蛋白在诱导骨再生中起到关键作用，基于生物活性分子的骨组织工程成为研究的热点。骨是高度血管化的组织，血管生成对骨再生至关重要。缺乏血管生成会导致骨再生中骨形成和骨总量减少。新生的血管对于营养供应、分子信号的传输和干细胞的运输十分重要。血管生成对骨再生的意义重大，众多学者尝试利用促进血管生成的因子与骨再生的因子结合共同促进骨愈合。本研究试图利用VEGF与BMP-2制备基因活化的仿生生物材料，观察其对骨缺损的愈合中的促进作用。
1 资料与方法
1.1实验分组 实验分为5个组，包括：纯壳聚糖/胶原支架，记为G1（group 1）；整合BMP-2腺病毒的壳聚糖/胶原支架，记为G2（group 2）；整合VEGF腺病毒的壳聚糖/胶原支架，记为G3（group 3）；整合BMP-2腺病毒和VEGF腺病毒的壳聚糖/胶原支架，记为G4（group 4）；以及整合BMP-2腺病毒和VEGF蛋白的壳聚糖/胶原支架，记为G5（group 5）。
1.2壳聚糖胶原支架的制备及复合病毒 将壳聚糖用0.5mol/L乙酸配成2%（w/v）的溶液，将胶原按2%比例溶解于壳聚糖溶液中，磁力搅拌48h后注入培养皿，4℃ 下放置30min，-35℃放置过夜，最后-80℃放置2h成型后移入冷冻干燥机冻干，48h后干燥完成。支架在接种细胞或病毒前需灭菌，具体步骤如下：先以0.3M NaOH的溶液中和材料中的乙酸，然后75%乙醇浸泡12h，大量PBS冲洗去除残余乙醇，紫外线照射30min。
将壳聚糖/胶原支架切块。在无菌操作台内，将病毒液滴于支架上，使之浸润，具体量为：对于G2，G3组，1ml 的腺病毒溶液滴到1mg 的干燥的壳聚糖/胶原支架上，4℃ 过夜使支架与质粒或腺病毒充分结合，然后-80℃放置2h成型后移入冷冻干燥机干燥。对于G4组， Ad-BMP-2与Ad-VEGF病毒液等体积混合后，吸取1ml滴到1mg壳聚糖/胶原支架上，4℃ 过夜使支架与质粒或腺病毒充分结合，然后-80℃放置2h成型后移入冷冻干燥机干燥。对于G5组，将2mg VEGF-D蛋白溶解于2ml的灭菌的去离子水中，获得的终浓度为浓度为1mg/ml，将2ml溶液滴于干燥的壳聚糖/胶原支架上，再将1ml 的Ad-BMP-2病毒溶液滴到1mg 的干燥的壳聚糖/胶原支架上，所获得的支架为每1mg 支架有2mg VEGF蛋白及1mlAd-BMP-2病毒液；4℃ 过夜使支架与质粒或腺病毒充分结合，然后-80℃放置2h成型后移入冷冻干燥机干燥（图1示冷冻干燥机及干燥过程）。
1.3整合不同生长因子的支架对骨髓间充质细胞增殖分化影响的相关研究 MTT 法检测支架材料对骨髓间充质细胞增殖的影响。将五种支架各选4 块置于24孔板内，第四代骨髓间充质细胞消化后，以1×105 细胞的密度接种于支架，每个支架100μl细胞悬液。3h后添加 150μl 10%FBS 的DMEM培养液继续培养，分别在1、3、7d 检测细胞增殖活性。
ALP检测：接种方法同前，3 h后添加 900μl 10%FBS 的DMEM 培养液继续培养，分别在7d和14d 检测ALP活性。具体方法如下：7和14d后，取上清液，80μl的上清加20μl的0.5M的AMP，然后加入100μl底物，混匀后37°孵育1h。取50μl上清，按碱性磷酸酶试剂盒说明书在405nm波长下测ALP活性。根据换算出的每孔细胞的ALP值和DNA的总量的比值来计算每孔细胞的ALP活性，单位是nmoles paranitrophenol/ng DNA/min。
1.4骨缺损修复的观察 选取 6 只2岁大的中华田园犬，手术在全麻下进行。局部消毒后，拔除下颌前磨牙，清理牙槽窝后，去除牙槽间隔，以得到骨缺损模型。植入种植体，将支架放入近中牙槽窝，缝合。将G1-G5组每组中的一个样本随机置于种植体近中缺损区，以保证每只狗都含有5个组的样本。术后肌肉注射抗生素（40万单位/ml，0.1ml/kg体重），动物软食2w。12w时取材，截取下颌骨种植体周围缺损区骨，低速涡轮机及去离子水冲洗冷却下分割标本，进行组织学观察。
2 结果
2.1 材料制备。
2.2通过MTT法检测支架材料对骨髓间充质细胞增殖的影响。第四代骨髓间充质细胞三维培养于支架材料中后，分别在1、3、7d检测，每组每个时间点检测四个样品。结果显示（图2），复合病毒或/和生长因子蛋白的壳聚糖/胶原支架与壳聚糖/胶原材料对骨髓间充质细胞的增殖没有影响，病毒或/和生长因子蛋白对骨髓间充质细胞的增殖无毒性作用。
2.3 ALP活性是细胞成骨向分化的标记。骨髓间充质细胞在各组复合支架上三维培养时的ALP活性如图3所示，7d和14d培养后，培养于复合Ad-BMP-2的支架上的骨髓间充质细胞均表现出较高的ALP活性（P
2.4组织学染色 组织学切片观察种植体周围的组织形态，图4可见，种植体周围均形生成了成熟的骨组织，骨组织中均有新生成的血管。定性观察发现，G3与G4组新生成的血管较其他组高，G2，G4及G5组的骨生成多于G1，G3组，以G5组最高。
3 讨论
骨缺损修复是复杂的生理过程，一般涉及到细胞迁移、增殖与分化以及骨重建[1]。通常骨形成可通过两种不同的方式：假如骨断端是固定的，或者在发育阶段颅面部骨形成过程中，在将要形成骨的部位间充质前体细胞直接分化为骨细胞成骨，成为膜内成骨；若发生在有动度骨折断端间，或者发育过程中的长骨和腰椎，则先形成软骨称之为软骨化骨。新生血管提供营养和氧气的供应，同时为血液循环中的间充质细胞提供途径到达缺损区，以及增加骨细胞的增殖分化而起作用，在骨折愈合的初期十分重要 [2]。VEGF是主要的血管生成因子[3]。它在出生后的血管生成起到重要的作用。VEGF对肥厚性软骨结构和血管化都十分重要。众多研究发现，VEGF 单独不能促进成骨[4，5]，已有研究证实VEGF与BMPs联合使用能促进细胞存活率[6]，诱导成骨细胞增殖与分化[7]，以及促进骨细胞迁移[8]，通过这种方式促进了骨的再生。众多学者在动物模型中联合应用VEGF 与BMP-2促进骨再生，总的来说，大多数因子的联合使用较单独使用能增加成骨，单独使用VEGF 不足以促进成骨，联合使用VEGF能促进骨再生中的血管再生，这与本研究结果一致。有研究指出，在骨折愈合中，血管发生发生在成骨之前[9]。因此，开发一种模拟内源性基因释放的这种呈时间特异性表达的基因控释系统对骨组织工程意义十分重大。
由于VEGF在骨再生中有多种作用， VEGF除了促进成骨细胞的存活，它还能诱导血管再生。VEGF刺激内皮的增殖与迁移，并参与祖细胞的招募及分化为内皮细胞[10，11]。高剂量的VEGF已被证实能导致血管通透性的增加，并在骨再生中诱导产生大量的非生理性的内皮细胞管腔[12]。
研究者已经成功复合了壳聚糖/胶原支架。对于复合支架来说，壳聚糖的加入能降低细胞介导的收缩率，即在培养细胞的过程中，复合材料的收缩度比单纯胶原支架的收缩率小，材料的机械性能有所增强。细胞在复合支架中更容易黏附，生长并增殖。分析是因为胶原成分的加入在四个方面提高了材料的细胞相容性：其一，降低了复合材料的孔径，增大了材料的细胞容积；其二，增大了复合材料的吸水性，使细胞在支架中更容易交换营养与代谢物；其三，胶原本身可作为细胞营养的来源；其四，降低了材料的降解性能，使细胞更容易渗透到支架内部生长继而引发进一步的支架降解。总的来说，本实验制备了一种基因控释支架，通过冷冻干燥法使生长因子与腺病毒结合，腺病毒介导的外源性基因能高效表达，在缺损区局部释放，避免了腺病毒导致的免疫反应，在骨再生中具有潜在的应用前景。
参考文献：
[1]Carano RA， Filvaroff EH. Angiogenesis and bone repair. Drug Discov Today 2003；8：980-9. [2]Asahara T， Takahashi T， Masuda H， et al. VEGF contributes to postnatal neovascularization by mobilizing bone marrow-derived endothelial progenitor cells[J]. EMBO J，1999，18：3964-3972.
[3]Peng H， Wright V， Usas A， et al. Synergistic enhancement of bone formation and healing by stem cell-expressed VEGF and bone morphogenetic protein-4[J]. J Clin Invest，2002，110：751-759.
[4]Peng H， Usas A， Olshanski A， et al. VEGF improves， whereas sFlt1 inhibits， BMP2-induced bone formation and bone healing through modulation of angiogenesis[J]. J Bone Miner Res， 2005，20（11）：2017-2027.
[5]Samee M， Kasugai S， Kondo H，et al. Bone morphogenetic protein-2 （BMP-2） and vascular endothelial growth factor （VEGF） transfection to human periosteal cells enhances osteoblast differentiation and bone formation[J]. J Pharmacol Sci，2008，108：18-31.
[6]Byrne AM， Bouchier-Hayes DJ， Harmey JH. Angiogenic and cell survival functions of vascular endothelial growth factor （VEGF）[J]. J Cell Mol Med，2005，9：777-94.
[7]Wang， D.S.， Miura， M.， Demura， H. & Sato， K. Anabolic effects of 1，25-dihydroxyvitamin d3 on osteoblasts are enhanced by vascular endothelial growth factor produced by osteoblasts and by growth factors produced by endothelial cells[J]. Endocrinology，1997，138： 2953-2962.
[8]Mayr-Wohlfart U， Waltenberger J， Hausser H， et al. Vascular endothelial growth factor stimulates chemotactic migration of primary human osteoblasts[J]. Bone，2002，30：472-477.
[9]Sojo K， Sawaki Y， Hattori H， et al. Immunohistochemical study of vascular endothelial growth factor （VEGF） and bone morphogenetic protein-2， -4 （BMP-2， -4） on lengthened rat femurs[J]. J Craniomaxillofac Surg，2005，33：238-245.
玩具简介：
“舀豆子”是一个投放在小班生活区的低结构玩具。
材料投放：两个大容器、大小不同的勺子、弹珠。
玩具的玩法：让孩子学会使用勺子，从装有弹珠的容器中将弹珠一个个舀到另一个空容器中，鼓励幼儿尽量把弹珠全部转移干净，并且保证弹珠不滚落出容器和勺子外。
一、基于观察的第一次材料投放
（一）观察案例
案例一：畅畅彩棒圈珠子
最近两次活动中，畅畅都游荡在各个区域间，看看这个，瞧瞧那个，就是不愿意进去玩，尽管老师引导了，她还是一个劲摇头，最终在好朋友的邀请下，选择生活区“舀珠子”的工作。她拿起勺子在小碗里将珠子从这个碗舀到旁边的空的小碗里，没过多一会儿，她就开始东张西望，已经对舀珠子的游戏没有了兴趣。看见旁边的琪琪正在进行小彩棒搭建的活动，畅畅忽然兴奋起来，她拿起小勺子，舀起碗里的弹珠，放到琪琪用小彩棒搭的格子里，咕噜咕噜弹珠滚到了地上。怎样才能让珠子固定不滚动？在反复尝试了多次，最终，她们用小彩棒搭了完整四边形珠子被圈住了。当时，谁也没有想到好办法，但这也为接下来的游戏埋下了有趣的伏笔，为弹珠找家成为了“热门话题”。
案例二：欣欣送珠子回家
这天，我好奇看着欣欣在低着头，弓着腰，小心翼翼在不停摆弄着，并随着小珠子的滚动，还发出“哎呀哎呀”的叹息声，只见她拿起勺子看看，好像在琢磨着什么，又在放勺子的盘里，看看这个勺子，看看那个勺子，终于选好自己想用的勺，即：欣欣一个勺把短并且凹面深的勺子。再次拿起心仪的勺子，欣欣一次就将弹珠放进瓶盖了，她激动地从小椅子上跳了起来，喊道：“我送珠珠回到了家了”！原来欣欣一直在做珠子和瓶盖颜色对应的游戏。
（二）案例解读
关键词：东张西望、彩棒、短且凹面深
1.东张西望：舀珠子虽然是一个低结构的材料，但是，由于教师提供的材料品种的单一，如：仅提供弹珠作为舀的材料，孩子对机械、重复、单一的活动已经不感兴趣，东张西望。真正吸引孩子的是有趣、多变开放性操作的材料，要给孩子提供更多尝试、创作、想象的空间。
2.彩棒：畅畅选择小棒表明在孩子与玩具互动中，能够自己自发选择材料，对游戏有浓厚的兴趣，有创新游戏的能力，同时也迫切需要教师多种材料的支持其深入的探究。
3.欣欣能够根据自己的能力认知，对教师提供的多种材料，加以调适和选择。教师可以根据幼儿的能力投放材料，也可以适度增加超出或降低其能力的材料投放，这样符合《指南》中60%孩子能达到设定目标，而另外超出能力的20%或低于能力20%的孩子，我们应提供更多材料供孩子选择。
如何在原有的基础上持续吸引幼儿的学习兴趣，又能对幼儿的能力有一定的促进，这让我更关注孩子们游戏中的变化。
（三）材料支持策略：关注幼儿兴趣、支持他们自主游戏。
关键词：两个维度 舀的工具、舀的内容
第一维度：舀的工具 进一步丰富舀的工具，首先可以从勺的变化中给予支持，如勺把长短变化、勺面深浅变化、勺材质的变化。让孩子通过实践操作感受舀的工具多种变化，激发幼儿探索新的玩法吸引幼儿的兴趣。
第二维度：舀的内容 提供多种材料进一步炼幼儿手眼协调能力及手部的控制力，提供大小、形状各异的颗粒物，如珠子、豆子、铃铛。也可以提供粉末状如面粉、包谷糁舀出容易两个面，还可以提供多种材料：泡沫块、小铁块等。进一步练习幼儿的精细动作，增加游戏的难度。
二、基于观察的第二次材料投放
（一） 观察案例：
案例一：孙嘉逸在玩舀水工作
在舀水的工作，孙嘉逸拿了一个瓶子、拿起大勺子满满舀了一勺水，低着头身体慢慢移动着，小心翼翼地往漏斗里到，但总是把水洒在桌上、地上，试过几次后，水还是洒在桌上，他环视着周围，试图在寻找着什么，耷拉着脑袋撅着小嘴 ，他想放弃游戏。
案例二： 晨晨在玩舀水工作：
晨晨先拿了一个瓶子，大口深的勺子，舀起满满一勺水，也出现了的问题，水洒的到处都是，咦！怎么回事，只见他拿起小勺子，三指捏住，又看看自己一把抓拿着大勺子，噢明白了，晨晨脸上露出微微的笑容。大勺子也用三指捏办法，这样试试好多了，反复练习几次后他成功了。不过这次在舀的材料和形式都有了新的变化，水桶里多了一些大小形状不同的积木、雪花片、乒乓球，这些玩具漂浮在水面上，不仅增添游戏的难度，也使操作活动更有趣味性。晨晨选用小勺子，很自如把漂浮物都舀了出来，脸上露出了成功的喜悦。
（二）案例解读
关键词：三指捏、平移提升、少量多添、丰富材料
1三指捏：晨晨从开始一把抓的拿勺方式，到通过自我调整，自己借鉴已有的经验和技能，调适为三指捏勺的方式，最终获得游戏的成功。
2.平移提升：舀液体对孩子有了更高的要求。勺子舀水后先慢慢平移到瓶底处，再自然向上提升到瓶口处，最后倾斜勺子倒水。这一系列的动作对孩子手部协调性及控制能力有了较高的要求。
3.少量多添：案例中幼儿舀满满的一勺水，出现了水洒在桌上、地上，通过控制舀水的量进行自我调适，采用少量多添的办法操作，达成了通过主动操作提高幼儿动手能力和手眼协调能力的学习目的。
4.丰富材料：孙嘉逸放弃游戏，反映出可供幼儿选择的材料不足。先提供宽口瓶、大口深的勺子，降低了游戏的难度。待舀的技能有了一定基础后，再选择窄口瓶进行尝试。晨晨通过自我调适动作完成游戏，选择舀水里的漂浮物，用新的材料进一步练习手眼的协调能力及手部的控制力。在同一年龄段投放不同难度的材料，这样既满足幼儿的一般发展需要，又满足了个别幼儿特殊发展需要，让缺乏自信的幼儿看到成功，让已成功的幼儿不断看到新的方向。
（三 ）材料支持策略：关注幼儿能力，适时调整材料投放
关键词：两个维度舀出容器、舀入容器
第一维度：舀出容器的变化 借鉴乌鸦喝水的故事，我思考从舀出容器本身的变化，增添游戏的难度 。如：原来盛物的容器小桶幼儿容易操作，为不断满足幼儿探索的欲望，改变舀出容器，提供窄口且深瓶子，幼儿在操作中不断尝试探索舀的方式。这样不仅增添游戏的难度，也使操作活动更有趣味性。
第二维度：舀入容器的变化 增加材料难度。如：将舀出的水倒在矿泉水的瓶盖上，增加游戏难度，进一步锻炼幼儿手眼协调能力和腕部的小肌肉的控制力。如：舀的是面粉，对幼儿有了更高的要求，倒入啤酒瓶时，不仅要控制好倒的速度，还要控制好勺子倾斜的角度。
三、基于^察的第三次材料投放
（一）观察案例
案例：运水游戏
我们将舀水的游戏活动，从室内转移到室外，从个人独立游戏演变成小组合作的运水游戏，游戏要求小组合作把大盆里的水运到对面的盆里，比一比哪组运的又快又好。
比赛开始，孩子们都用小碗、小杯、瓶子运水。石沐欣用小桶舀水后发现大盆里的水一下少了很多，她像发现新大陆似地说：“凯凯，快！你也去拿小碗舀水，晨晨我们一起抬起来。”欣欣他们拿来了小盆、用口杯、小碗往小桶里舀水……在大家齐心协力下，水很快就剩一点了，再怎么办呢？容容拿来了漏斗，把漏斗套在矿泉水瓶里，用勺子往瓶子里舀水。石沐欣着急地说：“这样太慢了，我们把大盆抬起来把水倒在瓶子里。几个孩子抬起大盆，“不好水洒在外面这样不行，还是用勺子舀吧”凯凯着急的大声喊道。……比赛结束了，石沐欣这组获得了第一名，孩子们高兴得跳起来。
（二）案例解读：
1.目标能够引导合作
小班幼儿以独立操作游戏为主，幼儿的交流合作较少。教师在设计“运水”游戏时，提供了各种能舀水材料，游戏的目标用不同的材料锻炼幼儿舀液体能力。以比一比哪组运的又快又好为游戏规则，激发幼儿合作的愿望，让幼儿尝试合作带来的乐趣。
2.材料能够促进合作
在玩“运水”的游戏中，提供了大小不一的舀水用具、一大盆水怎样又快又好的运完，简单的问题复杂化，增加了活动的难度，幼儿不能独立完成任务，迫使他们合作共同完成，在其中幼儿间多了一些分工、协商、配合的机会，使合作成了一种需要、一种必然，从而激发幼儿合作的欲望。
（三）材料支持策略：关注同伴间的材料，培养合作意识
关键词：两个维度 水量的变化、多元化的材料支持
