时间：2023-06-21 08:43:55
序论：速发表网结合其深厚的文秘经验，特别为您筛选了11篇职业素质的定义范文。如果您需要更多原创资料，欢迎随时与我们的客服老师联系，希望您能从中汲取灵感和知识！
白癜风是一种皮肤色素脱失、呈现白色斑的皮肤病。据统计，我国约有3000万的白癜风患者。中医理论认为，白癜风虽长在外表，根却在脏腑。系因于情志不舒、气血不和、脉络阻滞不通、毛孔闭塞、肌肤失养所致。
白癜风的病因:主要是脏腑失和,肝郁失疏,血热、外受风温、湿热之邪停留在肌肤,导致气血失调,血不营养肌肤和七情内伤,风邪搏于肌表,日久湿热内蕴,阻遏气血津液在人体正常分布流通,促使肝肾不足,肌肤失养,毛窍因子闭塞死亡,气滞则形成白癜风。其病因与遗传,免疫功能异常,内分泌代谢功能紊乱,黑色素细胞自身破坏,氨酸、铜离子缺乏,精神紧张,微循环障碍,神经调节功能异常,外伤,化学物质、烈日曝晒等有密切联系。
中药白癜风颗粒临床上治疗白癜风的效果比较好。白癜风颗粒由补骨脂、黄芪、红花、当归、川芎等15味中药组成。具有益气行滞、活血解毒、利湿消斑，驱风止痒之功效，在本院皮肤科应用多年，证实对白癜风等疾病有效。为了控制白癜风颗粒的质量，保证临床用药效果，本实验建立了HPLC测定白癜风颗粒中补骨脂素和异补骨脂素的方法。经方法学考察证实该方法特异性高，回收率和精密度好，结果满意。
仪器与试剂
Waters 600高效液相色谱仪；Waters[LL] 2487紫外、可见波长检测器；Breeze色谱工作站；十万分之一微量分析天平；补骨脂素对照品(110730-200309)和异补骨脂素对照品(0738-200108)购自中国药品生物制品检定所；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯，白癜风颗粒由本院自制。
方法与结果
色谱条件1～2：色谱柱,ReliaSil．C18(4．6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇,水(47：53)；流速,1.0ml/min；检测波长,245nm；柱温室温，进样量μl。对照品溶液的制备：精密称取补骨脂素对照品10．42mg，异补骨脂素10．92mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取1．5ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备：取本品粉末约0．5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
阴性对照品溶液的制备：按处方制备取不含补骨脂药材的样品颗粒剂，按供试品溶液的制备方法制成相应的阴性样品溶液。线性关系考察：精密吸取补骨脂素与异补骨脂素混合对照品溶液2、4、6、8、10μl分别注入液相色谱仪，测定补骨脂素与异补骨脂素色谱峰面积。以补骨脂素与异补骨脂素的进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：y=1．25×103+7．55×106x，r=0．9997。
结果表明，补骨脂素在0．031264~15630 μg具有良好的线性关系，异补骨脂素在0．03276~0．16380 μg具有良好的线性关系。
精密度实验：精密吸取同一供试品溶液(批号：050502)5μL，重复进样6次，分别计算补骨脂素和异补骨脂素的质量分数，结果其RSD分别为0．76％和1．29％。
稳定性试验：精密吸取对照品溶液5μL，分别于0、2、4、24、36小时测定峰面积，计算得补骨脂素和异补骨脂素峰面积的RSD分别为1．99％和1．62％，表明对照品补骨脂素和异补骨脂素在36小时稳定。
重现性实验：取样品，精密称定5份，制备供试品溶液，进样测定计算补骨脂素和异补骨脂素的质量分数，其RSD为0．59％。
回收率实验：采用加样回收法。取批号为050501的样品5份，每份0．25g，置具塞锥形瓶中，各精密加入补骨脂素和异补骨脂素混合对照品0．14mg，制备供试品溶液，进样，测定。结果补骨脂素和异补骨脂素平均加样回收率为99．04％，RSD为1．50％。
样品测定：取3批白癜风颗粒制备供试品溶液。精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μL，进样，测定，结果见表1。根据结果，暂定本品以干燥品计，含补骨脂素和异补骨脂素总含量不得少于0．22mg／g。
讨 论
流动相的确定：本实验曾选择乙醇-水溶液系统，结果不太理想，补骨脂素和异补骨脂素的出峰区间有干扰，峰形欠佳。而采用本实验的色谱条件即甲醇-水系统，补骨脂素和异补骨脂素的峰形得到明显的改善，且干扰减少 。
Abstract:Objective An RP-HPLC method was established for determination of psoralen and isopsoralen in Buguzhi tincture.Methods The XTerra RP18 (4.6 mm×250 mm，5 μm) was used. The mobile phase consisted of acetonitrile-water (0.28∶0.52). The detection wave length was 247 nm.Results The retention time of psoralen and isopsoralen angelicin was 14.326 min and 15.259 min respectively. The calibration range of psoralen was 0.88～14.08 mg·L-1. (r=0.9998) and that of isopsoralen was 0.80～12.80 mg·L-1（r=0.9999）; the average recovery was 99.5％（RSD=1.10％） and 100.4％（RSD=0.59％） respectively.Conclusion The method， being simple， rapid and accurate， can be used to examine the quality of Buguzhi tincture.
Key words: Buguzhi tincture； psoralen； isopsoralen； RP-HPLC
补骨脂酊是中药补骨脂通过提取制成的酊剂，其含有补骨脂素(psoralen)、异补骨脂素(isopsoralen)等有效成分，有镇静、解痉、抗癌和光敏等作用［1］。其有效成分能在黑色素细胞中浓集，在紫外线的作用下，能增加酪氨酸酶的活性，从而增加色素的生物合成能力，用于治疗白癜风［2］。补骨脂的有效成分测定方法有双波长薄层扫描法［3］、高效液相色谱法［4-5］等。补骨脂酊是我院使用多年的中药制剂，仅有定性鉴别，而无定量测定方法。本实验建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定其有效成分，方法简便，结果较满意，可作为补骨脂酊的质量控制。
1 仪器和试药
1.1 仪器 美国Waters高效液相色谱仪（包括1525二元高压梯度泵、717自动进样器、2487双波长检测器）；BP 618型电子分析天平（德国）；KS-80D型超声清洗机（宁波海曙科生超声设备有限公司）；XW-80A旋涡混合器（上海医科大学仪器厂）；pHS-3C型精密pH计（上海雷磁仪器厂）。
1.2 试药 补骨脂素中药化学对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110739－200511）；异补骨脂素中药化学对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110738－200309）；补骨脂酊为本院制备，甲醇、乙腈为色谱纯。
2 方法和结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Waters XTerra RP18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为乙腈－水（0.28∶0.52），流速为0.8 ml·min-1；，检测波长为247 nm；灵敏度为2.000AUFS；柱温为35℃；进样量10 μl。理论板数按补骨脂素峰计算应不低于14000，补骨脂素和异补骨脂素的分离度R大于1.8。
2.2 对照品溶液的制备 分别精密称取对照品补骨脂素和异补骨脂素约20 mg ，各置50 ml容量瓶中， 加入甲醇溶解并定容至50 ml，涡旋2 min，即得每1 ml中含补骨脂素0.44 mg和异补骨脂素0.40 mg的储备液，各吸取适量储备液混合稀释。
2.3 供试品溶液的制备 精密量取补骨脂酊1 ml，置50 ml容量瓶中， 加乙腈至刻度， 摇匀，作为供试品溶液。同法制备不含补骨脂素和异补骨脂素的空白样品溶液。 转贴于
2.4 HPLC方法专属性 分别取对照品溶液、供试品溶液、空白样品溶液适量进样。对照品溶液和供试品溶液中补骨脂素和异补骨脂素组分完全分离， 分离度R大于1.8，保留时间分别为14.326 min和15.259 min，无杂峰干扰测定。空白样品溶液在补骨脂素和异补骨脂素色谱位置处无吸收峰。见图1。
2.5 标准曲线的绘制 分别精密吸取0.44 g·L-1补骨脂素和0.40 g·L-1异补骨脂素的对照品溶液20 μl、40 μl、80 μl、160 μl、320 μl，放入同一10 ml容量瓶中，用乙腈分别稀释至刻度，取10 μl进样，以浓度（C）对应峰面积（A）进行线性回归。补骨脂素和异补骨脂素的回归方程如下。
补骨脂素：A1=－15426+102653C1，r＝0.9998，n＝5。
异补骨脂：A2=－6963+98991C2， r＝0.9999，n＝5。
结果表明：补骨脂素浓度在0.88～14.08 mg·L-1范围内，异补骨脂素浓度在0.80～12.80 mg·L-1范围内线性关系良好。图1 高效液相色谱图
峰1.补骨脂素；峰2.异补骨脂素
2.6 精密度实验 分别精密吸取补骨脂素和异补骨脂素的对照品溶液适量， 放入同一容量瓶并用乙腈稀释至刻度，按“2.1色谱条件”重复进样5次， 根据测定结果计算，浓度3.52 mg·L-1和14.08 mg·L-1补骨脂素的RSD分别为0.68％和0.46％；浓度3.20 mg·L-1和12.8 mg·L-1异补骨脂素的RSD分别为0.58％和0.41％。
2.7 稳定性实验 取同一对照品溶液，按“2.1色谱条件”进样，分别于0、1、2、4、8、12、24 h各时点进行测定，结果补骨脂素的RSD为1.37％，异补骨脂素的RSD为1.14％，表明样品溶液在24 h内基本稳定。
2.8 加样回收率实验 精密吸取已知含量（批号：080124）的样品适量，分别加入不同量的对照品溶液， 用乙腈稀释至刻度，每个浓度稀释2份进行测定，按“2.1色谱条件”操作，计算补骨脂素和异补骨脂素的回收率， 结果见表1。表1 补骨脂素和异补骨脂素的回收率
2.9 样品测定 精密吸取供试品溶液各0.1 ml， 用乙腈稀释至5 ml，按照“2.1色谱条件”各进10 μl，以峰面积带入回归方程计算样品的含量，结果见表2。 表2 样品中补骨脂素和异补骨脂素的含量
Determination of the Psoralen and Isopsorlen in Bupi Yichang Capsules by HPLC
WANG Jing-can1, KE Xue2, LIU Li-fang1*.
1 Department of Chinese Pharmaceutical Analysis, 2 Department of Pharmaceutics China Pharmaceutical University, Nanjing, 210038, China
【Abstract】 Oobjective To establish the method for determination of psoralen and isopsoralen in Bupi Yichang Capsules. Methods The Hedera ODS C18(250 mm×4.6 mm,5 μm) was used. The mobile phase consisted of methanol-water (58∶42).The flow rate was 0.8 ml/min.The detection wavelength was set at 245 nm. RESULTS The linear range of psoralen was 0.020-0.30 μg, r=0.999 8,the average recovery was 100.61% with RSD of 1.86%. The linear range of isopsoralen was 0.038-0.266 μg, r=0.999 9, the average recovery was 100.76% with RSD of 1.60%. CONCLUSION It is a simple and accurate method for the quality control of Bupi Yichang Capsules.
【Key words】 Bupi Yichang Capsules;psoralen; isopsoralen；HPLC
补脾益肠胶囊是将原补脾益肠丸中生药组分经提取后制得，由黄芪、补骨脂、党参、白芍、白术、延胡索、当归、砂仁、木香、防风、赤石脂、甘草等组成，具有补中益气，健脾和胃，涩肠止泻，止痛止血，生肌消肿作用。用于脾虚泄泻症，临床表现为腹泻腹痛、腹胀、肠鸣、黏液血便或阳虚便秘等证，以及慢性结肠炎、溃疡性结肠炎、结肠过敏见有上述证候者[1]。原补脾益肠丸为胃肠分溶型丸剂，外层在胃中溶散，在肠中吸收，以发挥全身的作用治其本，而内层在肠道中溶散，提高病灶部位的药物浓度，以提高药物局部作用治其标。补脾益肠胶囊保留了原制剂的这一特点，将胃溶部分提取物包薄膜衣，肠溶部分提取物包肠溶衣后装入胶囊。
胃溶部分中的黄芪、党参为方中君药。肠溶部分中的补骨脂为方中臣药，除甘草为使药外，其余均为佐药。补骨脂具有温肾助阳，纳气，止泻作用[2]。现代药理研究表明，补骨脂提取物具有抗菌、抗病毒作用，其水提液具有增强免疫的作用[3]。此外，补骨脂与赤石脂组成的止血复方中发现有效成分为补骨脂素[4]，因此本文以补骨脂素和异补骨脂素为本方中肠溶部分的指标性成分，采用高效液相色谱法对其含量进行测定，以控制产品的质量。
1 仪器与试药
1.1 仪器SHIMADZU LC-10ATvp型高效液相色谱仪（日本岛津），SPD-10Avp型紫外检测器（日本岛津）；Hedera ODS C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱；KQ-100型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；BS124S电子天平（德国赛多利斯）。
1.2 试药补脾益肠胶囊浸膏（深圳三九医药业股份有限公司提供），补骨脂素（批号：110739-200613，中国药品生物制品检定所），异补骨脂素（批号：110738-200511，中国药品生物制品检定所），色谱纯甲醇，纯净水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
流动相：甲醇∶水（58∶42）；流速：0.8 ml/min；柱温：室温；检测波长：245 nm[5]。
2.2 供试品溶液的制备
取补脾益肠胶囊浸膏1 g，精密称定，置50 ml容量瓶中，加甲醇约45 ml，超声30 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，过滤，取续滤液10 ml即得。
2.3 对照品溶液的制备
分别精密称取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，加甲醇制成每毫升各含0.1 mg的对照品溶液，临用时稀释到适当浓度。
2.4 空白对照试验
按本制剂的处方、工艺提取不含补骨脂药材的浸膏，按上述2.2方法制备阴性对照溶液。照上述色谱条件，吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各20 μl，分别注入液相色谱仪。
结果见图1。补骨脂素的保留时间为10.4 min，异补骨脂素的保留时间为11.7 min，二者的分离度为3.0，理论塔板数均在15 000以上，表明补骨脂素和异补骨脂素能够良好的分离，且方中的其他成分不干扰补骨脂素和异补骨脂素的测定。
图1 HPLC图谱
A.对照品溶液（1.补骨脂素 2.异补骨脂素）B.供试品溶液 C.阴性对照溶液
2.4 方法学考察
2.4.1 线性关系的考察
分别取补骨脂素和异补骨脂素对照品适量，精密称定后，以甲醇溶解并定容于同一容量瓶中制成每1ml中各含补骨脂素和异补骨脂素100μg和200μg的混合对照品溶液作为储备液。精密吸取储备液，以甲醇稀释配制成补骨脂素和异补骨脂素浓度分别为1.0、2.0、5.0、8.0、10.0、12.0、15.0；1.9、3.8、5.7、7.6、9.5、11.4、13.3 μg/ml的溶液，分别吸取上述对照品溶液20 μl，按上述色谱条件进行测定。以峰面积A为纵坐标，溶液浓度C(μg/ml)为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。其中，补骨脂素的标准曲线为A=209 056C+3485.1，r=0. 999 8，线性范围为0.020~0.30 μg；异补骨脂素的标准曲线为A=201 857C－33777，r为0.999 9，线性范围为0.038~0.266 μg。
2.4.2 精密度考察
取对照品溶液，按上述色谱条件分别重复进样5次，结果补骨脂素RSD为0.20%，异补骨脂素RSD为0.23%，表明该方法的精密度良好。
2.4.3 稳定性考察
取新鲜配制的供试品溶液分别于0、2、4、6、8、10、24 h进行测定，结果补骨脂素RSD为1.10%，异补骨脂素RSD为1.45%，说明供试品溶液在24h内是稳定的。
2.4.4 重复性试验
精密称取补脾益肠胶囊肠溶浸膏5份，按2.2方法配成供试品溶液，测定含量，结果补骨脂素的平均含量为2.663 mg/g，RSD为2.16%，异补骨脂素的平均含量为1.439 mg/g，RSD为2.79%，说明重现性较好。
2.4.5 加样回收试验
精密称取已知含量的样品5份，分别精密加入补骨脂素对照品和异补骨脂素对照品，按2.2方法制备5份，分别进样，测定。结果补骨脂素平均回收率为100.61%，RSD为1.86% (n=5)，异补骨脂素平均回收率为100.76%，RSD为1.60% (n=5)，见表1。
3 讨论
在供试品溶液的制备过程中，对超声时间进行了考察，在超声0、10、30 min后样品中补骨脂素的含量分别为2.363、2.534、2.6 mg/g；异补骨脂素的含量分别为1.221、1.318、1.4 mg/g，再延长超声时间，补骨脂素和异补骨脂素的含量不再增加，因此供试品溶液在制备时超声时间选择为30 min。
本实验采用高效液相色谱法测定补脾益肠胶囊中补骨脂素和异补骨脂素的含量，经方法学考察，本法简便，准确，重现性好，可以用于控制补脾益肠胶囊的质量。
参考文献
[1] 中华人民共和国卫生部.药品标准•中药成方制剂(第18册)
[2] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典.化学工业出版社,2005:129.
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）01（b）-0008-03
Content of stachydrine hydrochloride from Motherwort granule determined by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry
LI Ming
Institute for Food and Drug Control of Beihai in the Guangxi Zhuang Autonomous Region，Beihai 536000，China
[Abstract] Objective To establish a method of high performance liquid chromatography （HPLC）-tandem mass spectrometry determining the content of stachydrine hydrochloride from Motherwort granule. Methods The chromatographic conditions were Agilent SB-C18 column （50 mm×2.1 mm，1.8 μm），acetonitrile to 0.2% glacial acetic acid （70U30） as the mobile phase，and a flow rate of 0.3 ml/min.Positive ion electrospray ionization（ESI+） was applied for mass spectrometric detection under multiple reaction monitoring（MRM） mode.The monitored ions （m/z） was 144/58，144/84 respectively. Results The concentration of stachydrine hydrochloride being within 0.2 μg/ml to 10.0 μg/ml had a good linear relationship with the peak area.The r value was 0.9992，and the average recovery was 102.6% and the value of RSD was 1.5%（n=6）. Conclusion The method is fast，simple，specific，and accurate in outcome，which can be used for quality control of Motherwort granule.
[Key words] Motherwort granule；Stachydrine hydrochloride；High performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry
益母草颗粒是由益母草水提取物为主要原料加蔗糖、糊精等辅料经适当加工而成的妇科常用中成药，具有活血调经止痛等功能，临床上用于治疗经闭、痛经、产后瘀血腹痛及产后恶露不绝、经量少、淋漓不净、产后出血时间过长、产后子宫复旧不全等。益母草中的主要活性成分为盐酸水苏碱。益母草颗粒为《中国药典》2010年版一部收载品种[1]，其对益母草中的盐酸水苏碱含量测定采用薄层色谱扫描。该方法影响因素多，数据重现性差。部分文献[2-20]采用高效液相色谱法，选用紫外检测器[2-14]、蒸发光检测器[15-19]、示差折光检测器[20]测定益母草制剂中盐酸水苏碱的含量。其大多数使用较特别的色谱柱，如氨基色谱柱、磺酸基阳离子交换色谱柱、丙烯酰胺色谱柱，且样品提取过程复杂，操作不简便。本文采用高效液相色谱-串联质谱法，利用质谱较高的选择性和专一性，只用普通的C18反相色谱柱，只需简单的超声提取即能完成对益母草颗粒中盐酸水苏碱含量的测定，而该方法国内文献未被报道过。测定结果表明，该方法操作简便、专属性强、灵敏度高、结果准确可靠，可用于该制剂的质量控制。
1 仪器与试剂
美国Agilent 1290高效液相色谱仪，Agilent 6460三重四极杆串联质谱；AX205DU电子天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]；SK250超声波清洗器（上海科导仪器有限公司，250 W，35 kHz）。
盐酸水苏碱对照品（中国食品药品检定研究所，含量：99.0%，批号：110712-201010）供含量测定用；益母草颗粒（A厂：批号130304；B厂：批号140402；C厂：批号130402），为市售品；乙腈为色谱纯，水为市售娃哈哈纯净水，冰乙酸为优级纯，其余检测用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱及质谱条件
2.1.1 色谱条件 色谱柱为Agilent SB-C18柱（50 mm×2.1 mm）；流动相为乙腈-0.2%冰乙酸（70U30）；流速为0.3 ml/min；柱温为30℃；进样量为5 μl。
2.1.2 质谱条件 离子源为大气压电喷雾离子源（ESI源），选择扫描方式为正离子，采用全扫描、选择离子扫描及二级全扫描；雾化气压力：30 Psi（1 Psi=6890 Pa），干燥气温度：300℃，辅助气（N2）流速：8.0 L/min，离子源Vcap毛细管电压：4000 V，含量测定监测方式为多反应监测模式（MRM），盐酸水苏碱定性离子质荷比（m/z）144/84，定量离子质荷比144/58；定性和定量离子对应的碰撞能量压分别为22、26 V，碎裂电压均为128 V。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取盐酸水苏碱对照品12.55 mg，置25 ml量瓶中，加70%乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得浓度为0.497 mg/ml对照品贮备溶液。精密量取对照品贮备液1 ml，置25 ml量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为19.9 μg/ml的对照品使用溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品5包颗粒内容物，研细混匀，称取约5 g重量，精密称定，置50 ml量瓶中，加70%乙醇约40 ml，超声处理（功率250 W，频率35 kHz）20 min，取出放冷至室温，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀、过滤，精密量取续滤液2 ml置100 ml量瓶中，加70%乙醇定容至刻度，摇匀，经微孔滤膜（0.45 μm）过滤，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 按药品标准中的处方比例和制法制备不含益母草的阴性样品，照供试品溶液的制备方法操作制备阴性对照溶液。
2.3 专属性考察试验
精密量取上述对照品使用溶液，供试品溶液，阴性对照溶液各5 μl注入高效液相色谱-质谱联用仪，按上述色谱及质谱条件下测定，记录色谱图，结果盐酸水苏碱的保留时间约为3.5 min，溶液内的其他杂质不干扰样品中的盐酸水苏碱分离测定，阴性样品在盐酸水苏碱色谱峰相应的保留时间处未见干扰峰出现，表明方法的专属性良好（图1）。
2.4 线性关系考察试验
精密量取上述对照品使用溶液0.1、0.5、1、2、5 ml分别置10 ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，即得一系列浓度的标准曲线对照品液。取每个浓度的标准曲线对照品液各5 μl分别注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定，记录峰面积，进行线性考察。以浓度（X）对峰面积（Y）进行线性回归，得回归方程Y=31.96X+3.94×103（r=0.9992）。结果表明，盐酸水苏碱在0.2～10.0 μg/ml的浓度范围内有良好的线性关系。
2.5 重复性试验
取同一批号样品（批号：130304）共6份，按供试品溶液的制备方法平行配制6份供试品溶液，同法测定，测得平均含量为6.0265 mg/g，RSD为1.67%，表明方法有较好的重复性。
2.6 精密度试验
取盐酸水苏碱对照品使用溶液5 μl，注入高效液相色谱仪，连续进样5次，结果峰面积的RSD为0.77%，表明分析方法精密度良好。
2.7 稳定性试验
精密吸取同一份供试品溶液5 μl，分别在0、2、4、6、8、10、12、16、20 h按上述色谱条件下进行测定，结果盐酸水苏碱峰面积RSD为1.1%，表明在20 h内供试品溶液中盐酸水苏碱峰面积无明显变化，供试品溶液在20 h内稳定。
2.8 加样回收率试验
取同一批号（批号：130304）的已知含量样品5包，取颗粒研细混匀，称取6份约2.5 g细粉，精密称定，分别置50 ml量瓶中，分别精密加入盐酸水苏碱对照品适量，分别加70%乙醇约40 ml，超声处理20 min，取出放冷，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀、过滤，分别取续滤液2.00 ml，用70%乙醇定容至100 ml量瓶，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为回收率测定的供试品溶液。再按上述色谱及质谱条件下进样，测定盐酸水苏碱峰面积，按标准曲线测得含量，计算加样回收率。结果平均回收率为102.6%，RSD为1.5%（表1）。
表1 加样回收率试验测定结果（n=6）
2.9 样品含量测定
取不同生产厂家样品3批，按上述供试品溶液的制备方法配制供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录峰面积，代入线性方程计算含量。3个厂家3个批号样品含量测定结果见表2。
表2 样品含量测定结果（n=3）
3 讨论
3.1 提取时间的选择
在供试品溶液的制备上，本实验通过对不同超声的提取时间（10、20、30、40 min）进行考察，结果显示，超声提取20 min已将样品中的盐酸水苏碱提取完全。
3.2 流动相比例的选择
在流动相的选择上，流动相中乙腈与0.2%冰乙酸的比例经过多次配比试验，当乙腈U0.2%冰乙酸=70U30时样品中的其他成分对盐酸水苏碱的测定无干扰，且盐酸水苏碱的出峰时间适当，峰形、理论塔板数均较理想，故选用该比例进行测定。
3.3 质谱条件的选择
在对质谱条件的优化考察中，为使盐酸水苏碱的各子离子峰信号达到最强，以正、负离子模式分别进行检测，进行二级质谱扫描并通过优化裂解电压以及碰撞能压，经多次实验达到最佳的质谱条件。
3.4 本实验方法的优点
益母草颗粒的原质量标准中的含量测定采用薄层色谱扫描法测定，其处理较为繁琐，测定时间长，数据重现性差，而高效液相色谱法，色谱柱选择要求条件高，样品提取过程复杂，部分方法采用检测器灵敏度低。本文采用高效液相色谱-串联质谱法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱的含量，具有较高的选择性和专一性，灵敏度高，色谱柱选择较普通常用，操作简便、重复性好。
[参考文献]
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：1025.
[2] 李研研，刘晓琰，陆国红，等.HPLC法测定肾八味胶囊中盐酸水苏碱含量[J].中国药师，2008，11（6）：624-625.
[3] 张韵，黄瑞红，何桂区.HPLC法测定安坤益母草片中盐酸水苏碱的含量[J].广东药学院学报，2008，24（1）：16-17.
[4] 李政海，苏作林，廖展苇，等.HPLC法测定益母草颗粒（无蔗糖型）中盐酸水苏碱的含量[J].中国医药导报，2011， 8（26）：70-72.
[5] 郑倩，雪艳，李晓敏.HPLC法测定坤宁颗粒中盐酸水苏碱的含量[J].中国药事，2010，24（4）：392-393.
[6] 严优芍，李卫民.HPLC法测定益母草分散片中盐酸水苏碱的含量[J].广东药学院学报，2006，22（6）：604-606.
[7] 余琪，章曙丹.益母草片中盐酸水苏碱的HPLC测定[J].中国医药工业杂志，2006，37（1）：34-35.
[8] 仇其原，邓晓文，吴D.HPLC法测定益母草膏中盐酸水苏碱的含量[J].齐鲁医药，2010，29（4）：209-210.
[9] 包小红，周娟，伍丕娥.HPLC法测定4种益母草制剂中盐酸水苏碱及其标准方法评价[J].中成药，2012，34（9）：1825-1828.
[10] 唐哲，刘莉，张玮.RP-HPLC法测定益母草不同药用部位中的盐酸水苏碱的含量[J].中国中医药信息杂志，2008， 15（8）：51-52.
[11] 施法，段瑞，马晓璐.HPLC法测定益母草胶囊中的盐酸水苏碱的含量[J].中国药品标准，2008，9（4）：307-308.
[12] 张玉萌，项菲菲.益母草饮片中的盐酸水苏、盐酸益母草碱含量测定[J].辽宁中医药大学学报，2013，15（2）：73-74.
[13] 邹洪君，王宇杰，王志海.高效液相色谱法测定益母草胶囊中的盐酸水苏碱的含量[J].辽宁中医杂志，2008， 35（7）：1064-1065.
[14] 吴海林，甄录旭，方宗华，等.HPLC法测定益母草中的盐酸水苏碱的含量[J].安徽医药，2008，12（7）：597-598.
[15] 黄蘅，陈学松，廖强.HPLC-ELSD法测定益母草中的盐酸水苏碱[J].中国药师，2009，12（12）：1749-1750.
[16] 王晓燕，王舒.HPLC法测定益母草颗粒中的盐酸水苏碱的含量[J].实用医药杂志，2012，29（6）：523-524.
[17] 莫怀初.应用HPLC法测定益母草颗粒中的盐酸水苏碱的含量[J].当代医药论丛，2014，12（1）：197-198.
[18] 林冬杰，张会球.HPLC-ELSD法测定益母草流浸膏中的盐酸水苏碱的含量[J].亚太传统医药，2009，5（2）：45-46.
现有文献概述与方法选取
（一）现有文献概述
产品内分工是指特定产品的生产过程所包含的不同生产环节与零部件在空间上分散到不同国家或地区，由这些国家或地区专业化于该产品特定生产环节的生产。而以产品内分工为基础的中间品贸易则称为产品内贸易。这种新型的国际分工与贸易成为西方国际经济学最新前沿研究领域之一（唐铁球，2008）。1960年代以来，发展中国家以加工贸易为主要形式参与产品内国际分工体系，有力地推动了本国工业化进程和经济的快速发展。Arndt（1997、2002），Jones和Kierzkowski（2000、2002）等从要素禀赋与规模经济因素等方面解释了产品内分工与贸易产生的动因。围绕这些因素，国内外研究者也进行了一些实证检验： Egger.H和Egger.P（2005）分析了欧盟12国的双边产品内贸易的动因，Athukorala（2006）和Zeddies（2007）利用零部件贸易数据分别研究了东亚和欧盟内部的产品内分工与贸易的决定因素。喻春娇、张洁莹（2010）利用机电产品零部件贸易数据考察了中国的区域市场规模、外部需求变动、区位优势差异、中间产品进口等因素对中国参与东亚跨国生产网络的影响。
（二）测度方法选取
以上研究也存在有待改进的地方：一是多是基于发达国家的视角来分析产品内分工与贸易的决定因素；二是衡量产品内分工水平的方法主要是零部件贸易法；三是在计量实证中对交易成本在产品内分工作用中的重视不够。目前，测度产品内分工水平的方法主要有零部件贸易法、投入产出法和加工贸易法。零部件贸易法，虽然计算直接，但由于现实中很多中间产品没有归入零部件范围，从而易严重低估产品内贸易额。投入产出法，尽管可以利用投入产出表将中间产品都包括进去，但其所统计的进口中间产品仅涉及出口产品生产部分。为克服以上缺陷，本文选择加工贸易法，根据归纳提炼的基于发展中国家视角的产品内分工与贸易影响因素的理论框架，选取中国2000-2008年间29个省份的加工贸易数据，兼顾生产成本和交易成本，分东中西部就加工贸易进出口进行计量回归，实证检验中国制造业参与产品内分工与贸易的决定因素。
中国制造业参与产品内分工与贸易的理论分析
从本质上说，对国际分工与贸易动因的研究是国际贸易理论的中心任务。产品内分工是国际分工在产业间分工与产业内分工的基础上再进一步深化与细化发展的结果，其产生与发展既离不开传统的比较优势和静态与动态的规模经济，也离不开科学技术的进步和由此带来的交易成本的大幅下降。就此意义而言，比较优势与规模经济作为影响产品生产成本的基本因素，是产品内分工产生与发展最基本的动因，而交易成本对于分工的发展也发挥着重要作用。
（一）产品内分工与贸易和比较优势
在产品内分工与贸易下，分工更加细化与深化，比较优势已经由产品层面深入到生产环节层面，其范围得到进一步拓展，从而有力地促进了发展中国家生产效率的提升和国民福利的增加。具体而言，一方面，在产品内分工与贸易下，由于某一特定产品，如电子产品的生产包括若干生产环节，这些生产环节往往具有不同的要素结构与比例要求，从而使得发展中国家只要在该产品的特定生产环节上具备一定的比较优势，就可以加入到该产品的国际分工网络中，从而更充分地发挥自身的比较优势（Deardorff，2001）。另一方面，对于发展中国家而言原本就具有比较优势的劳动密集型产品，由于分工深入到生产环节层面，因而也会促进生产效率的提高和国民福利的增进。
（二）产品内分工与贸易和规模经济
从新贸易理论的角度分析，规模经济也是促使产品内国际分工发生的重要因素。规模经济可分为静态规模经济与动态规模经济两个层面。从前一个层面看，某一特定产品的不同生产环节往往有不同的最佳规模，通过产品内分工与贸易，这些最佳规模不同的生产环节可以分解到到具有相应生产优势的国家或地区进行，从而确保每个生产环节都能达到最佳规模经济利益。对于发展中国家而言，其制造业的生产规模越大，规模经济效应越显著，生产效率就越高，对发达国家的跨国外包的吸引力则越强；从后一个层面看，在产品内分工与贸易下，分工更加细化和深化，企业不是专业化于某一完整产品的生产，而是专业化于该产品中企业具有比较优势的某一生产环节的生产，由此促进了企业生产效率的提升，进而促使企业产量累积速度加快，并通过“干中学效应”，使经验积累不断增加，生产效率得到进一步提升，国民福利得到不断增进。
（三）产品内分工与贸易和其他动因——基于交易成本的视角
比较优势与规模经济在解释产品内分工的动因时，存在一定的局限，即二者仅涉及生产成本，而没有考察交易成本。但产品内分工使得某一特定产品生产过程所包含的诸多生产环节在空间上被拆解到不同国家或地区进行，由此形成的全球性分工生产网络必然导致一系列交易成本的产生，如进出口关税、运输费用、契约签订与履行成本、信息传递成本等。1960年以来， 随着投资与贸易自由化的发展和通讯运输技术的进步等，国际贸易与投资中的交易成本大幅下降，从而有力地促进了产品内分工的快速发展。例如，Harris（2002）认为通讯服务作为一种半公共产品，具有较强的外部经济性。1960年以来逐渐形成与完善的全球网通讯络系统，降低了产品内分工与贸易中的通讯成本，导致中间产品的生产呈现规模收益递增，由此形成的高额利润又吸引更多的中间产品生产企业加入，从而进一步降低了产品内分工与贸易中的通讯成本，产品内分工与贸易也因此进一步扩张，形成一种良性循环的发展态势。Jones（2000）指出在产品内分工与贸易中，由于在总成本中运输成本占比较大，因而运输成本上的微小变化也会给产品内分工和贸易带来显著的扩张效应。Hummels等（1998；2002）则认为在产品内分工与贸易中，中间产品或零部件在国与国之间的交易次数会明显增加，而由此发生的关税成本稍有下降都会对产品内分工与贸易产生乘数放大的促进效应。因此，投资与贸易自由化所带来的关税等贸易壁垒的削减也是推动产品内分工与贸易发展的重要动因之一。
综上所述，可以归纳出中国制造业参与产品内分工与贸易的决定因素的理论框架，如图1所示。
中国制造业参与产品内分工与贸易动因的计量分析
（一）模型设定
根据中国制造业参与产品内分工与贸易的决定因素的理论框架，可以设定计量回归模型如下：
lnYOit=α0+α1lnRLFC1it+ α2lnRLFC2it+α3lnSCAit+α4lnOPENit+α5 lnROADM it+α6lnELECTRMit+ α7 lnITCit+α8D1it+α9D2it+εit （1）
lnYIit=β0+β1lnRLFC1it+ β2lnRLFC2it+β3lnSCAit+β4lnOPENit+β5lnROADMit+β6lnELECTRMit + β7lnITCit+β8D1it+β9D2it （2）
其中，下标t表示年份时间，i表示省市地区。
YO是出口方面的产品内分工与贸易程度，YI是进口方面的产品内分工与贸易程度。前面已经指出本文采用加工贸易法来测度产品内分工与贸易的程度。加工贸易是中国制造业参与产品内分工与贸易的主要形式，其在加工贸易总额中占比超过90%。但由于难以得到各省市制造业细分行业的加工贸易及其他相关数据，故本文借鉴Egger.H和Egger.P（2005）的方法，分别用加工贸易进口与总进口的比值和加工贸易出口与总出口的比值来计算中国制造业参与产品内分工与贸易的程度大小。
RLFC1是各省市制造业员工的工资率，反映了劳动力的成本；RLFC2则是各省市普通高校在校学生数占人口数的比例，反映了劳动力的素质。SCA是各省市工业产值在地区生产总值中的占比，反映了制造业生产的规模经济。OPEN 是各省市进出口总额在地区生产总值中的占比，反映了投资与贸易自由化的程度。ELECTRM、ROADM和ITC分别是发电量、公路里程数和市内电话户数，反映了交易成本对产品内分工与贸易的影响。D1、D2是虚拟变量，分别表示东部、中部和西部地区。
（二）样本选择与数据来源
本文选取2000-2009年，东部地区的12个省市（北京、天津、山东、河北、辽宁、上海、浙江、江苏、广东、福建、海南、广西），中部地区的9个省市（吉林、内蒙古、黑龙江、河南、山西、安徽、湖南、湖北、江西），西部地区的8个省市（四川、云南、贵州、陕西、青海、甘肃、宁夏、新疆），共29个省市作为分析样本，样本容量为261。各省市贸易进出口总值与加工贸易进出口值均来自国研网《对外经济贸易数据库》和相应年份的各省市统计年鉴。其余数据均可从《中经网统计数据库》与中国统计年鉴获取。为消除价格变动的影响，特采用相关物价指数将本文涉及的价值量绝对值调整为 2000年不变价格。
（三）实证检验与结果分析
表1中I栏是对包含虚拟变量D1与D2的公式进行回归的结果。从结果看， D1具有一定的显著性，而D2则无显著性，表明无需分东部、中部与西部三部分进行回归，这可能是由于中西部地区的加工贸易额在加工贸易总额中占比偏小所致，因此保留D1，剔除D2，即将样本区分为东部与非东部两个部分进行再次回归。表1中II栏是对只包含虚拟变量D1的公式回归的结果。下面以其为依据对中国制造业参与产品内分工与贸易的各个影响因素进行分析：
第一，比较优势。RLFC1对加工贸易出口影响系数的估计值为-2. 327837，对进口的估计值为-1.850284。这与前面的理论分析结果相吻合，表明比较优势因素是较显著的解释变量，也意味着中国参与产品内分工最重要的基础或动因是劳动力的要素禀赋优势。中国作为最大的发展中国家，劳动力资源丰富而廉价是其主要优势。据国际劳工组织网站统计，2004年，与新兴工业化国家相比，中国制造业雇员工资水平大约是新加坡的1/12，韩国的1/3；与发达国家相比，中国雇员工资水平大约是美国的1/21、日本的1/22、加拿大的1/23、德国的1/24、英国的1/27；与其他发展中国家相比，中国雇员工资水平大约是墨西哥的1/3、马来西亚的1/4、巴西的1/3。丰富而廉价的劳动力资源是吸引发达国家将其劳动密集型生产环节转移到中国大陆的决定性因素。RLFC2对加工贸易出口影响系数的估计值为0.5227034，对进口的估计值为0.44264。这也与事实相符。改革开放以来，随着九年制义务教育的推广普及，特别是进入21世纪后中国高等教育的大发展，中国劳动力的素质有了明显提升，从而为中国制造业广泛而深入地融合到产品内国际分工体系中奠定了良好基础。
第二，规模经济。SCA对加工贸易出口影响系数的估计值为1. 057614，对进口的估计值为0.748352。这与理论分析的结果一致，表明规模经济对加工贸易进出口有较显著的影响。从事实上看，改革开放以来，制造业作为中国国民经济发展的基础，发展非常迅速，其规模与质量均有很大的提升。据统计，中国制造业总值在1985-1991年间年均增长8.01%，1992-1998年间年均增速虽有所减慢，但仍达到5.39%，而1999-2010年间则年均增长20.32%。近年来，中国制造业总产值已位居世界第二，仅次于美国，已成为全球制造大国。而随着产品生产与出口规模的不断扩张，中国制造业的技术进步明显加快，其内部的产业结构在不断优化升级。中国加工贸易的出口产品，从1980年初到1990年代初，主要是纺织服装等劳动密集型产品；在1990年代，产品结构则由传统劳动密集型产品为主向机电产品为主提升；而从新世纪以来，生产资本与技术密集型产品的加工贸易则得到了迅猛发展。改革开放以来，中国制造业的规模经济效应愈加明显，从而为其提升技术水平，优化内部结构，进而更好地参与产品内分工与贸易创造了有利的条件。
第三，投资与贸易自由化。OPEN对加工贸易出口影响系数的估计值为0.507401，对进口的估计值为0.324686，这与理论分析的结果一致，表明贸易与投资自由化因素规模经济对加工贸易进出口也有较显著的影响。事实上，改革开放以来，中国制定和实施了一系列旨在促进投资与贸易自由化的优惠政策，不断改善和投资与贸易相关的制度质量，从而从政策调整与制度变迁等方面促使加工交易过程中的交易成本大幅下降，客观上也为中国制造业参与产品内分工与贸易提供了良好的条件。
第四，基础设施。ELECTRM和ROADM对加工贸易出口影响系数的估计值分别为0.507401与0.138524，对进口的估计值分别为0.324686与0.074794，这也与前面的理论分析结果基本吻合，说明ELECTRM解释能力较强，但ROADM的回归系数不太显著。事实上，在二十世纪八十年代与九十年代的两次大规模的国际产业转移中，中国正是依靠其领先于其他发展中国家或地区的电力交通等基础设施上的优势，而成为亚洲四小龙、日本和欧美发达国家产业转移的首选地，从而实现了产品内分工与贸易的快速发展。
第五，信息交流技术。ITC对加工贸易出口影响系数的估计值为-0.546613，对进口的估计值为-0.184202。ITC也有较强的解释能力，但其符号为负，与理论分析的结果相反。从实践来看，近三十年来，在全球信息革命的有力推动下，中国的通讯工具与通讯手段都有了极大的改善，从而为降低产品内分工与贸易过程中的信息交流成本，进而促进产品内分工与贸易的发展奠定了良好的基础。但是II栏的回归结果却表明，反映信息交流技术水平的ITC对中国制造业参与产品内分工与贸易程度的影响是负向的，其原因可能如下：本文选择的市内电话户数ITC只是衡量了信息交流技术水平的一个方面，而信息交流技术的进步还包括移动电话使用量、互联网入网量、传真业务或电子邮件量等诸多方面，但由于数据获取的限制，本文无法用综合指标来反映信息交流技术水平的基本状况。所以产品内分工与贸易程度与仅仅反映信息交流技术进步某个方面的市内电话户数ITC呈负向关系也是可能的。
第六，虚拟变量D1。虚拟变量D1对加工贸易出口影响系数的估计值为 3.502307，对进口的估计值2.60685，这表明非东部地区的加工贸易发展水平远低于东部地区。从实践来看，与非东部地区相比，东部地区具有人口稠密的劳动力优势、与国际市场相接近的优势、较为完备的基础设施优势、以及对外开放的优先次序带来的制度质量优势和政策优势等，这些因素决定了东部地区的产品内分工与贸易发展水平要远高于非东部地区。
结论
三十多年以来，随着国际分工由产业间分工、产业内分工深入发展到产品内分工，国际贸易也相应地由产业间贸易、产业内贸易深入发展到产品内贸易，产品内分工与贸易已经成为当代国际贸易发展的新趋势。改革开放以来，中国制造业正是通过参与产品内分工与贸易，获得了快速发展，逐渐成为世界制造中心。本文在对旨在解释最终产品国际贸易动因的传统主流国际贸易理论进行修正的基础上，对中国制造业参与产品内分工的决定因素进行了实证分析，结果表明：第一，劳动力成本的比较优势是中国制造业参与产品内分工与贸易的最重要的决定因素；第二，中国制造业本身的生产规模对其参与产品内分工与贸易产生显著影响；第三，投资与贸易自由化程度、基础设施的完备状况、信息交流技术水平也对中国制造业参与产品内分工与贸易有着重要影响；第四，因为东部地区具有独特的区位、政策优惠、制度和基础设施等方面优势，因此其产品内分工与贸易的发展水平要远高于其他地区。
参考文献：
中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：1006-1533(2012)05-0041-04
Simultaneous determination of both isoprenaline hydrochloride injection and epinephrine hydrochloride injection and their related substances by HPLC method
SUN Ke-gang , SHI Jian-guo* , JIANG Yu-dan
(Shanghai Harvest Pharmaceutical Co.,Ltd, Shanghai,201206)
ABSTRACT Objective: To establish a method for the determination of both isoprenaline hydrochloride injection and epinephrine hydrochloride injection and their related substances. Method: An HPLC was performed on a column of Welch Materials C18 (150 mm×4.6 mm,5 μm) with the mobile phase of methanol- acetonitrile sodium heptanesulfonate solution (1∶1∶8) at detection wavelength of 280 nm. Results: For isoprenaline hydrochloride, the calibration curve was linear (r=0.999 9) over the range of 10～40 µg・ml-1, the average recovery was 100.5% with RSD 0.76% and the limit of detection was 40.66 ng・ml-1. For epinephrine hydrochloride, the calibration curve was linear (r=0.999 6) over the range of 60～240 µg・ml-1, the average recovery was 100.2% with RSD 0.60% and the limit of detection was 44.12 ng・ml-1. Conclusion: This method is simple, rapid, accurate, high sensitive and good reproducible, which can be applied in the determination of both isoprenaline hydrochloride injection and epinephrine hydrochloride injection and their related substances.
KEY WORDS HPLC； isoprenaline hydrochloride；epinephrine hydrochloride； injection；assay； related substances
盐酸异丙肾上腺素注射液和盐酸肾上腺素注射液，主要成份分别为盐酸异丙肾上腺素和盐酸肾上腺素。两者均为肾上腺素类受体激动剂，使心脏收缩力增强，心率加快，骨骼肌血管、支气管平滑肌舒张。临床上做为抢救药，用于治疗心源性或感染性休克、心搏骤停等。盐酸异丙肾上腺素注射液[1]和盐酸肾上腺素注射液[2]均为《中国药典》2010年版二部收载品种，均采用高效液相色谱法进行含量测定及有关物质检查，但色谱条件不同，为将两个品种的检验方法进行统一，以方便生产检验，本文在中国药典提供的色谱系统的基础上进行优化，建立了同一种色谱条件测定盐酸异丙肾上腺素注射液和盐酸肾上腺素注射液的含量与有关物质。
1 仪器与试药
美国Agilent 1100高效液相色谱仪，VWD紫外检测器，Sartorius CPA225 D电子天平。盐酸异丙肾上腺素(山东科源制药有限公司)；肾上腺素(武汉武药制药有限公司)；盐酸异丙肾上腺素注射液(规格：2 ml∶1 mg)和盐酸肾上腺素注射液(规格：1 ml∶1 mg)由本公司提供。乙腈、甲醇、庚烷磺酸钠为色谱纯，水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 盐酸异丙肾上腺素注射液的溶液制备
1)供试品溶液的制备。精密量取盐酸异丙肾上腺素注射液适量，加0.1%焦亚硫酸钠溶液制成20 µg・ml-1的溶液。
2)对照品溶液的制备。精密称取盐酸异丙肾上腺素对照品适量，加0.1%焦亚硫酸钠溶液溶解并定量稀释制成20 µg・ml-1的溶液。
3)对照溶液的制备。精密量取盐酸异丙肾上腺素注射液1 ml，置100 ml量瓶中，加0.1%焦亚硫酸钠溶液稀释至刻度，摇匀。
2.2 盐酸肾上腺素注射液的溶液制备
1)供试品溶液的制备。精密量取盐酸肾上腺素注射液适量，加4%醋酸溶液制成0.12 mg・ml-1的溶液。
2) 对照品溶液的制备。精密称取肾上腺素对照品适量，加4%醋酸溶液溶解并定量稀释制成0.12 mg・ml-1的溶液。
3)对照溶液的制备。精密称取重酒石酸去甲肾上腺素对照品12 mg，置10 ml量瓶中，加流动相溶解至刻度，摇匀，精密量取1 ml，置100 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成12 µg・ml-1去甲肾上腺素的溶液。精密量取5 ml，置50 ml量瓶中，精密加入供试品溶液5 ml，用流动相稀释至刻度，摇匀。
2.3 空白辅料溶液的制备
称取焦亚硫酸钠适量，用4%醋酸溶液溶解并稀释制成0.2 mg/ml焦亚硫酸钠的溶液。
2.4 色谱条件
色谱柱：Welch Materials C18色谱柱(4.6 mm×150 mm，5 µm)；流动相：甲醇-乙腈-庚烷磺酸钠溶液（取庚烷磺酸钠1.76 g，加水溶解并稀释至800 ml，摇匀）（1∶1∶8）。检测波长：280 nm；流速：2.0 ml/min；柱温：30 ℃。
2.5 系统适用性试验
取重酒石酸去甲肾上腺素对照品10 mg，加0.1 mol/L盐酸5 ml使溶解，取1 ml，加30%过氧化氢溶液0.1 ml，摇匀，在紫外光灯（254 nm）下照射90 min，加流动相9 ml，摇匀，作为系统适用性试验溶液[3]。取系统适用性试验溶液20 µl，注入液相色谱仪，除主成分峰外，应有相对保留时间1.2和1.5的两个降解峰，主峰及两个降解产物之间的分离度均应符合要求。理论板数按去甲肾上腺素峰计算不低于2 000（图1）。
2.6 专属性试验
分别取空白辅料溶液及两种注射液的供试品溶液、对照品溶液各20 µl，进样，结果表明空白辅料不干扰盐酸异丙肾上腺素和盐酸肾上腺素的含量测定（图2、图3）。
2.7 线性关系及范围
分别精密称取盐酸异丙肾上腺素适量，按“2.1 2)”配制成10、16、20、24、32、40 µg・ml-1的溶液，各取20 µl，按“2.4”项下测定，记录色谱图。以盐酸异丙肾上腺素峰面积(X)对其质量浓度(Y，mg・ml-1)进行回归，得盐酸异丙肾上腺素回归方程为：Y=5.935×103 X-21.50，r=0.999 9。结果表明盐酸异丙肾上腺素在10～40 µg・ml-1范围内与峰面积线性关系良好。
分别精密称取肾上腺素适量，按“2.2 2)”配制成60、96、120、144、192、240 µg・ml-1的溶液，各取20 µl，按“2.4”项下测定，记录色谱图。以盐酸肾上腺素峰面积(X)对其质量浓度(Y，mg・ml-1)进行回归，得盐酸肾上腺素注射液回归方程为：Y=1.142×104 X+26.56，r=0.999 6。结果表明肾上腺素在60～240 μg・ml-1范围内与峰面积线性关系良好。
2.8 检测限的考察
按信噪比3∶1测得盐酸异丙肾上腺素和盐酸肾上腺素最小检测限为40.66 ng・ml-1和44.12 ng・ml-1。
2.9 精密度试验
配制供试品溶液共6份，分别进样20 µl，盐酸异丙肾上腺素注射液标示量RSD值为0.44%，盐酸肾上腺素注射液标示量RSD值为0.09%。
2.10 回收试验
按处方量的80%、100%、120%并分别按“2.1”和“2.2”配制16、20、24 µg・ml-1的盐酸异丙肾上腺素溶液和96、120、144 µg・ml-1盐酸肾上腺素溶液，各取20 µl，按“2.4”项下方法测定，计算得盐酸异丙肾上腺素的平均回收率为100.5%，RSD值为0.76%(n=9)；盐酸肾上腺素的平均回收率为100.2%，RSD值为0.60%(n=9)。
2.11 含量测定
取对照品溶液、供试品溶液各20 µl，按照“2.4”项下方法测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。将盐酸异丙肾上腺素注射液三批和盐酸肾上腺素注射液三批含量测定结果分别与《中国药典》2010年版方法比较，差异不大(表1、2)。
2.12 有关物质的检查
精密吸取空白辅料溶液、对照溶液、盐酸异丙肾上腺素注射液各100 µl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰（扣除相对保留时间为0.07之前的辅料峰和溶剂峰），与辅料峰相邻的最大色谱峰不得大于对照溶液主峰（盐酸异丙肾上腺素）面积的10倍（10.0%）；其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍（1.5%），其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的2倍（2.0%）(表3、图4)。
精密吸取空白辅料溶液、供试品溶液、对照溶液各20 µl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。供试品溶液的色谱图中如有与去甲肾上腺素峰保留时间一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，不得过肾上腺素标示量的1.0%。如有其他杂质峰，扣除焦亚硫酸钠峰、醋酸峰及之前的辅料峰，与辅料峰相邻的最大色谱峰不得大于对照溶液中肾上腺素峰的峰面积(10%)，及其他各杂质峰面积之和不得大于对照溶液中肾上腺素峰面积的0.1倍(1.0%)(表4、图5)。
2.13 盐酸异丙肾上腺素与盐酸肾上腺素的同时测定
分别取盐酸异丙肾上腺素注射与盐酸肾上腺素注射液供试品溶液5 ml和1 ml，混匀，进样20 µl，结果发现盐酸异丙肾上腺素与盐酸肾上腺素两峰分离效果良好（图6）。
3 讨论
经实验比较，本法与药典法无差异，但本法同时适用于盐酸异丙肾上腺素注射液、盐酸肾上腺素注射液的含量测定和有关物质检查，方便生产上对肾上腺素类产品的同时检验。
参考《中国药典》2010年版二部中盐酸异丙肾上腺素注射液的流动相：庚烷磺酸钠溶液-甲醇（80∶20）（用1 mol/L磷酸调节pH值至3.0），为使流动相同时适用于盐酸异丙肾上腺素和盐酸肾上腺素，对流动相的比例进行调整，发现流动相比例为甲醇-乙腈-庚烷磺酸钠溶液（1∶1∶8）时，主成分峰与杂质峰的分离情况最好，故选用其为流动相。紫外扫描图显示盐酸异丙肾上腺素和肾上腺素均在280 nm波长有最大吸收，因此选择280 nm波长作为检测波长。美国药典[4]记载盐酸肾上腺素注射液含量测定采用的色谱柱长度为150 mm，流速采用2.0 ml/min，经试验用柱长为250 mm的色谱柱，主峰出峰都较晚，为25 min之后，故选择采用150 mm长度的色谱柱，流速采用2.0 ml/min。
盐酸异丙肾上腺素与盐酸肾上腺素分子结构中均具有儿茶酚（邻苯二酚）结构，性质不稳定，接触空气或受日光照射，极易被氧化变质，故制成注射液需加入焦亚硫酸钠作为抗氧剂。但焦亚硫酸与邻苯二酚易生成磺化物，虽可通过本文所研究的色谱方法对该磺化物进行分析，但还须对该磺化物生成过程进一步研究确认，且在有必要时应进行相关的药理毒理研究。
盐酸异丙肾上腺素注射液和盐酸肾上腺素注射液，光照、高温破坏后降解产物较少，酸、碱、氧化破坏后均产生大量降解产物。但主成分与降解产物的分离度均符合要求，不干扰盐酸异丙肾上腺素注射液和盐酸肾上腺素注射液含量及有关物质测定。
参考文献
[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典：2010 年版（二部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：701-702.
[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典：2010 年版（二部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：460.
子宫颈癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一。发病年龄以40～60岁居多[1]，宫颈癌及癌前病变TCT检查，是一种简便、快速、安全、准确和创伤性极小的诊断技术，TCT技术在妇科检查中已广泛应用，它是一个有效筛查发现肿瘤细胞的常规方法[2]，现将笔者所在医院TCT检查见异形细胞，后进行组织学活检的216例患者作对比分析，以求得到认识上的提高，并作为患者预后及指导临床治疗的可靠指标。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集笔者所在科2011年10月-2012年10月间门诊“两癌筛查”及住院患者进行的TCT检查病例2842例，经术后病理组织学检查确诊患者216例，恶性病变28例，其中宫颈原位癌21例，浸润癌7例，上皮内高度病变148例，其中中度不典型增生（CIN2级）124例，重度不典型增生（CIN3级）24例，上皮内低度病变（CIN1级）40例，年龄32～66岁，中位年龄43岁，216例患者均作CK17、Ki67、P16激素受体测定。
1.2 方法 用AGQ-20一次性塑料毛刷宫颈取样器采集宫颈及阴道脱落细胞，放入ABY细胞专用保存液中，经常规处理制片，95%乙醇固定，巴氏法染色，免疫组化采用SP法染色，PH6.0柠檬酸缓冲液高压修复，DAB显色，试剂CK17、Ki67、P16均由福州迈新生物技术开发有限公司提供。
1.3 结果判定 自1988年美国细胞协会提出TBS（The Beseheda System）细胞学分类诊断后，1991年和2001年又分别做了两次修订[3]，提出宫颈上皮细胞异常是TBS对宫颈细胞等异常改变的一个总称，包括鳞状上皮和腺上皮异常，鳞状上皮异常又分为：（1）非典型鳞状上皮细胞，包括不能明确意义的（ASC-US）和倾向于上皮内高度病变（ASC-H）。（2）低级别鳞状上皮内病变（LSIL），包括CIN1级和HPV感染细胞学的改变。（3）高级别鳞状上皮内病史（HSIL），相当于CIN2级，CIN3级，或鳞状上皮中度，重度异型增生及原位癌的细胞学改变。（4）鳞状细胞癌（SCC）。腺上皮异常包括非典型腺细胞（AGC）炎性所致和倾向于肿瘤，腺癌。免疫组化参照文献[4]，CK17表达以细胞质棕黄色为阳性，P16表达以细胞核棕黄色为主，Ki67阳性表达定位于细胞核，将阳性的细胞数量和强度分为4级，染色强度与背景无明显差别为（-），阳性细胞数≤10%，染色强度大部分较弱为（±），阳性细胞数>50%，染色强度为中至强染色者为（+++），介于两者之间为（++）。
1.4 统计学处理 采用SPSS 10.0软件进行Speaman等级资料的相关性分析，P
2 结果
2.1 TCT结果 2842例TCT检查病例中，有病理组织学诊断对照216例正确率96.8%（209/216），TCT诊断恶性肿瘤，组织活检对比正确率为100%（28/28），其中宫颈原位癌占75.0%（21/28），浸润癌占25.0%（7/28），包括鳞形细胞癌96.4%（27/28）为子宫颈癌中最常见的类型，与文献[5]报道一致，腺癌3.6%（1/28），上皮内高度病变68.5%（148/216），其中CIN2级83.8%（124/148），CIN3级16.2%（24/148），上皮内低度病变CIN1级18.5%（40/216），年龄32～66岁，中位年龄43岁，216例患者均作CK17、Ki67、P16激素受体测定。
2.2 免疫组化结果 CK17在宫颈不成熟鳞状上皮化生中（IM）阳性表达率近乎100%，明显高于LSIL和HSIL（10%和15%），显示CK17在宫颈IM和CIN病变中的阳性表达差异极显著（P
3 讨论
3.1 TCT特点 采用膜式离心制片技术，应用梯度分层的细胞保存液，可有效地分离黏液与血液，锥式离心保存杯，能有效地采集全部细胞标本，特种封膜支架可均匀地筛铺有效细胞，涂片细胞多，异型性明显，成群的细胞大小悬殊，成鱼鳞状排列，核仁明显，清晰，便于识别。
3.2 TCT的临床应用 TCT是检查宫颈癌及癌前病变的一种重要的诊断方法，笔者所在科开展TCT多年，体会TCT是诊断宫颈癌及癌前病变的简便、快速、安全，准确率较高，损伤性极小的诊断技术与传统的巴氏涂片检查相比，明显提高了满意度及宫颈异常细胞的检出率，病理医师经与常规病理切片进行对照，观察更有利于提高TCT的诊断水平。
3.3 CK17，Ki67，P16与宫颈癌及癌前病变的关系 （1）CK17在胞质中表达明显，伴随宫颈鳞状上皮细胞的分化成熟度增加，CK17阳性着色呈现递减趋势，如宫颈鳞状上皮细胞分化成熟后，CK17阳性仅限于基底层细胞，而在CIN中，CK17表达于间变细胞下的基底层细胞，大部分间变细胞呈阴性（-）或弱阳性（±）。由此说明，宫颈鳞状上皮细胞分化越成熟，CK17阳性表达率越高，患者预后越好。（2）Ki67在正常宫颈鳞状上皮基底细胞核中呈阴性（-）或弱阳性（±）表达，而在CIN病变中随着级别增高，其阳性表达率逐渐增强，在宫颈癌中Ki67呈高度强阳性表达，提示患者恶性越明显，预后较差，P16以胞核棕黄色为（±），P16在不成熟鳞状上皮化生和其他非肿瘤性宫颈上皮中均为阴性，而在CIN病变中随着级别增加，阳性表达明显增加，呈胞核/胞质全层阳性，也提示患者宫颈上皮细胞分化不成熟明显，恶性越明显，其预后较差。（3）宫颈鳞状上皮CK17阳性率越高，患者癌变率越低，而Ki67，P16阳性率越高，其癌变率越高，故宫颈癌及癌前病变患者应常规检测CK17、Ki67，P16这对病理诊断分级，预测预后，指导临床治疗及提高生存质量具有重要临床意义和实用价值，值得普遍推广。
3.4 宫颈癌及癌前病变的治疗 目前宫颈癌通用的治疗方法是根据患者对保留子宫的愿望，分别采用冷刀宫颈锥切术或全子宫切除术[6]，对于不满意阴道镜检查和病灶位于子宫颈管部位较深的患者，采用冷刀锥切术是杜绝漏诊的最好办法[7]，对宫颈锥切患者具有诊断和治疗宫颈上皮内病变的双重作用，可以早期发现微小浸润癌，并准确了解其深度及宽度。有学者认为宫颈冷刀锥切保留了切除标本的组织评价价值，可以最大限度避免遗漏浸润癌，对手术的彻底性有准确的评估[8-9]。
参考文献
[1] 李玉林.病理学[M].北京：人民卫生出版社，2004：297.
[2] 丁华野，周晓军.使用液基细胞制片机的体会[J].诊断病理学杂志，2011，18（6）：431.
[3] 黄受方.新版《子宫颈细胞学Bethesda报告系统》读后感[J].诊断病理学杂志，2005，12（3）：161-163.
[4] 丁华野，周晓军.CK17和P16在宫颈鳞状上皮不成熟化生和宫颈上皮内瘤变中的表达及意义[J].诊断病理学杂志，2009，16（3）：174-176.
[5] 田杨顺.妇科肿瘤临床病理学[M].北京：人民卫生出版社，2001：101.
[6] 卜淑娜.宫颈上皮内瘤变43例手术前后病理分析[J].北京医学，2012，34（10）：939.
[7] 李晴，李卫红.子宫颈锥形切除术病理结果分析[J].中国肿瘤临床，2005，32（3）：687.
[中图分类号] R394.21 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）10（b）-0080-03
食管癌（esophageal cancer）是我国常见的消化道恶性肿瘤之一，其病因和发病机制尚未完全阐明，手术治疗是其标准治疗手段[1]；但该病起病隐匿，其早期诊断率较低，对于不能手术或术后及放化疗后复发、转移的晚期食管癌，联合化疗仍是其主要治疗手段[2]。近年来，细胞因子在食管癌发病机制中的作用越来越受到重视，研究表明[3-4]，胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factor-1，IGF-1）、转化生长因子-β1（transforming growth factor-beta 1，TGF-β1）与大肠癌、前列腺癌、乳腺癌、食管癌等多种肿瘤的生物学行为密切相关。基于此认识，本文探讨了由吉西他滨（GEM）、氟尿嘧啶（5-FU）、亚叶酸钙（LV）组成的GLF联合化疗方案治疗老年晚期食管癌的临床疗效及其对患者血清IGF-1及TGF-β1的影响，现报道如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2008年1月～2011年10月在我院住院治疗的老年食管癌患者68例为研究对象，均经病理组织学或细胞学检查确诊，且具有可测量病灶。68例患者中，男43例，女25例；年龄59～76岁，平均（63.5±6.6）岁；病灶位于食管中段36例，下段23例，上段9例；病理类型：鳞癌45例，腺癌14例，腺鳞癌9例；分期：Ⅲ期44例，Ⅳ期24例；肺转移6例，纵隔、锁骨上淋巴结转移8例，腹腔淋巴结转移4例；均为初诊患者，未接受过放化疗和手术治疗，按照美国东部肿瘤协作组（eastern cooperative oncology group，ECOG）一般状况评分标准：0～1分46例，2 分22例。所有患者均无心、肝、肾等重要脏器疾病，无其他肿瘤病史。本研究经医院伦理委员会审议通过，并与患者签署知情同意书。
1.2 方法
1.2.1 治疗方法 所有患者均行锁骨下静脉穿刺或经外周静脉穿刺中心静脉置管，在镇痛、营养等对症支持处理的基础上，予以GLF方案：吉西他滨（GEM，商品名：泽菲，江苏豪森药业有限公司生产）800 mg/m2，第1、8天，静脉滴注30 min；亚叶酸钙（LV）200 mg，第1～5天；氟尿嘧啶（5-FU）350 mg/m2，第1～5天，静脉滴注，21 d为1个周期， 2个周期后评价疗效，获有效、稳定且患者可耐受时继续应用，最多化疗6周期。
1.2.2 检测方法 所有患者均在治疗前、治疗结束后，于清晨、空腹状态下，采肘静脉血3 mL，EDTA抗凝，4℃ 3 000 r/min高速离心10 min，分离血清，-20℃低温保存备用。应用放射免疫法测量血清IGF-1的含量，酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清TGF-β1的含量，IGF-1试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司，TGF-β1试剂盒购自比利时BioSource公司。以系列标准品浓度与样本同时进行检测，操作步骤严格按照说明书进行。同时，于治疗前、治疗结束后，检查患者血常规、尿常规、肝肾功能、心电图、彩超及胸部CT、腹部B超、肿瘤标志物、头部MRI或骨核素扫描等。记录可能发生的不良反应。
1.3 评价标准
1.3.1 疗效评价 参照RECIST《可测量病灶疗效评价标准》评价近期疗效。①阳性病灶全部消失为完全缓解（CR）；②最大长径缩小30%以上为部分缓解（PR）；③增加30%以上（多个靶病变最大径之和增加20%以上）为进展（PD）；④介于PR和PD之间为疾病稳定（SD）。客观缓解率（ORR）包括至少相隔4周确认的CR和PR，疾病控制率（DCR）包括CR、PR和初次服用药物至少6周后的SD者。
1.3.2 无进展生存期（PFS）与总生存期（OS） PFS指从首次用药到疾病进展或因任何原因死亡的时间间隔（以发生在先的事件计算）。在数据截止时尚未进展或死亡的患者，及研究中失访的患者将以其最后一次肿瘤评价的日期计算。OS指首次用药到因任何原因死亡的时间。在数据截止时尚存活的患者或在研究中失访的患者将以最后一次联络的日期作为截尾数值进行分析。
1.4 统计学方法
采用SPSS 13.0统计软件进行数据分析，计量资料用（x±s）表示，采用t检验；计数资料及率的比较用χ2检验，Kaplan-Meier统计中位PFS和OS，以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 临床疗效
患者治疗2～6个周期，平均（4.5±0.6）个周期；CR 1例（1.47%），PR 36例（52.94%），SD 15例（22.06%），PD 16例（23.53%），客观缓解率（ORR）为54.41%，疾病控制率（DCR）为76.47%。
2.2 生存期
随访至2012年3月底，中位PFS为6.2个月（95%CI 4～13个月），中位OS为10.5个月（95%CI 6～16个月）。
2.3 血清IGF-1及TGF-β1水平
患者治疗前后血清IGF-1及TGF-β1水平比较如表1所示，可见治疗后血清IGF-1及TGF-β1水平均明显降低，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。
2.4不良反应
4例患者出现骨髓抑制，2例患者发生轻微腹泻，1例患者出现神经毒性，3例患者出现转氨酶升高，未见其他严重的危及生命的毒性反应，不良反应发生率为14.71%。
3 讨论
食管癌的发生和发展是遗传、环境、生活方式等多因素综合作用的结果，近年来研究表明，在此过程中细胞因子发挥着重要作用，在乳腺癌、前列腺癌、肝癌、食管癌等多种肿瘤性疾病中可检测到某些细胞因子的过表达，如在血清中可检测到IGF-1及TGF-β1水平的显著升高。IGF-1是是一种细胞增殖调控因子，与人体正常胚胎发育、组织修复、细胞增殖分化等生理活动有关。大部分IGF-1存在于血液中，且以结合形式存在，仅有1%的IGF-1以游离形式存在，它以自分泌、旁分泌和内分泌方式与肿瘤细胞表面的相应受体（IGF-1R）结合，促进肿瘤细胞分裂增殖，促进细胞向恶性表型转化，并抑制肿瘤细胞的凋亡，从而参与了肿瘤的发生和发展[5]。TGF-β1是一种多功能细胞因子，在肿瘤细胞主要通过自分泌、旁分泌和内分泌的方式产生，具有诱导局部血管增生、胞外基质生成以及抑制免疫监视作用等，同时还可增加细胞的异质性黏附，促进肿瘤侵袭和转移，因而它在肿瘤的发生、发展中起着重要作用[6]。目前的前沿研究多选用IGF-1及TGF-β1作为食管癌免疫疗效、术前评估、预后及复发预测的一个重要观察指标。有鉴于此，本研究亦选用该两项指标进行辅助疗效评价。
目前，食管癌的常规治疗以手术、放疗为主，但是预后较差，患者5年的生存率仅为20%左右；且患者就诊时对为晚期或已远处转移，因此近年来随着新药物的开发，化疗在食管癌综合治疗中的地位逐步提升，如吉西他滨（GEM）、紫杉醇（TAX）、多西紫杉醇（TAT）等应用于食管癌的治疗，明显改善了患者的预后。本研究中，患者化疗选用的是由吉西他滨（GEM）、氟尿嘧啶（5-FU）、亚叶酸钙（LV）组成的GLF联合化疗方案。该方案中，吉西他滨是一种是细胞周期特异性的药物，通过脱氧胞嘧啶核苷激化酶磷酸化，转化成为具有活性的二磷酸及三磷酸，导致DNA合成中断，引发细胞的死亡，从而发挥抗肿瘤作用。氟尿嘧啶能抑制胸腺嘧啶核苷酸合成酶，阻断脱氧嘧啶核苷酸转换成胸腺嘧啶核苷核，干扰DNA合成，对RNA的合成也有一定的抑制作用[7]。亚叶酸钙是叶酸还原型的甲酰化衍生物，系叶酸在体内的活化形式，可与二氢叶酸还原酶结合而阻断叶酸向四氢叶酸盐转化，可限制化疗药物对正常细胞的损害程度，通过相互间竞争作用，并能逆转甲氨蝶呤对骨髓和胃肠黏膜反应。文献[6-8]研究表明，GLF联合化疗方案具有疗效较好，毒副作用较小的特点。本研究结果也进一步印证了上述文献的结论。研究表明，患者治疗2～6个周期后，客观缓解率为54.41%，疾病控制率为76.47%，中位PFS为6.2个月，中位OS为10.5个月，不良反应发生率为14.71%。在生化指标方面，以血清IGF-1及TGF-β1水平作为指标，治疗后血清IGF-1及TGF-β1水平均明显降低，差异具有高度统计学意义（P < 0.01）。
综上所述，可见GLF联合化疗方案为老年晚期食管癌治疗提供了新的途径和思路，抑制了血清IGF-1及TGF-β1的活性，进而可能抑制了肿瘤细胞的增殖与转移等，具有较好的肿瘤抑制作用，且毒副作用可耐受，比较适合于老年晚期食管癌的临床治疗。
[参考文献]
[1] Shammas MA. Repetitive sequences， genomic instability and Barrett's esophageal adenocarcinoma [J]. Mob Genet Elements，2011，1（3）：208-212.
[2] Iim HS，Kim SJ，Kim IJ，et al. Predictive value of metabolic tumor volume measured by 18F-FDG PET for regional lymph node status in patients with esophageal cancer [J]. Clin Nucl Med，2012，37（5）：442-446.
[3] Wang Y，Adachi Y，Imsumran A，et al. Targeting for insulin-like growth factor-I receptor with short hairpin RNA for human digestive/gastrointestinal cancers [J]. J Gastroenterol，2010，45（2）：159-70.
[4] Yuan Y，Chen H，Ma G，et al. Reelin is involved in transforming growth factor-β1-induced cell migration in esophageal carcinoma cells [J]. PLoS One，2012，7（2）：31802.
[5] Doyle SL，Donohoe CL，Finn SP，et al. IGF-1 and its receptor in esophageal cancer： association with adenocarcinoma and visceral obesity [J]. Am J Gastroenterol， 2012 ，107（2）：196-204.
[6] Natsuizaka M，Ohashi S，Wong GS，et al. Insulin-like growth factor-binding protein-3 promotes transforming growth factor-{beta}1-mediated epithelial-to-mesenchymal transition and motility in transformed human esophageal cells [J]. Carcinogenesis，2010，31（8）：1344-1353.
中图分类号：G71 文献标识码：A 文章编号：1673-9795（2014）04（b）-0252-02
心理素质是人的身体、心理和社会素质之一，是先天因素与后天因素的“合金”。简单地说，心理素质是以生理素质为基础，在实践活动中通过主体与客体的相互作用，而逐步发展和形成的心理潜能、能量、特点、品质与行为的综合。近年来，随着我国素质教育的不断深化，心理素质教育在素质教育中的作用日益突出。中等职业学校教育应该“以服务为宗旨，以就业为导向”，加强学生的思想道德建设，为学生求职就业做好心理准备。因此，中等职业学校的心理健康教育应该紧紧围绕提升学生“心理素质”的核心，有效帮助学生正确认识和处理成长、学习、生活和求职就业中遇到的心理行为问题，促进学生身心全面和谐发展。
1 心理素质含义及其结构
1.1 两种心理素质观
非职业角度的心理素质观：认为心理素质包含六个方面：（1）自组织系统，该系统包括心理能力（智力因素）、心理动力因素（人格）和身心潜质3个亚系统，它们之间是交互作用的动态同构；（2）心理素质以人的自我意识发展为核心，是由积极的和社会发展相统一的价值导向的非智力因素有机结合的复杂整体。（3）动态综合体：该综合体是多类别、多要素、多品质系统，包括智力因素、非智力因素、心理健康和潜能因素。（4）人格和个性：心理素质就是人格和个性，包括需要、动机、兴趣、理想、信念、世界观、能力、气质和性格。（5）综合体现：心理素质所体现的内容是性格、品质、心理能力、心理健康状况以及心因的水平或质量。（6）心理品质：这种心理品质以心理条件为基础，通过内化形成稳定的有衍生功能的能力，并与人的社会行为和创造行为密切联系。
职业角度的心理素质观：分别从护士心理素质、中学校长心理素质、运动员心理素质、公诉人心理素质、教师心理素质、竞赛心理素质、企业家心理素质、中国传统管理人员心理素质等研究群体着手研究特殊人群的心理素质构成。
1.2 心理素质结构
现有对于心理素质的定义和内涵的理解，主要从认知、个性、心理品质等心理学起点做为线索，并由此出发，概括和归纳心理素质的内容，并根据内容中认定相应重要的点来制定或强调心理素质培养的重点。比如，中科院王极盛研究员通过大量研究心理素质与学生成绩的相关关系中提出的心理素质概念就是涵盖这3方面的“动态综合体”。西南大学教育科学研究所张大均教授通过对于大学生大范围调查问卷研究，提出心理素质结构，分为认知，个性和适应维度，其中适应和发展是其制定心理素质培训课程的两条基本线索。同时，也有研究者通过对于己有心理素质定义的内涵概括抽取制定自己定义，并在此基础上提出大学生心理素质的结构并验证该结构。综上所述发现，对于心理素质结构，要么取一个大而全的框架，要么依照各自的研究思路确定维度和操作性定义，这使得心理素质缺乏统一认定的核心，更没有确定的判断标准。
2 中职生与普高生的心理素质调查
2.1 问卷编制
探索心理素质结构，一般需从寻找心理素质结构的底层成分出发，心理现象的构成成分即可作为心理素质成分的根源，即从认识过程、情感过程、意志过程、个性心理四个方面构想问卷比较全面。考虑到中学生对心理健康专业术语掌握比较有限，问卷设计需要半开放形式，共由三部分组成，第一部分为半开放式问卷，问题为“在你认为属于心理素质内容的项目后面划勾”，项目共有22个，分别是，心境、激情、应激、自觉性、果断性、坚持性、自制力、自我认识、自我评价、自我监控、行为、兴趣、需要、动机、理想、信念、价值观、人生观、世界观、能力、气质、性格。第二部分为开放式问卷，写出10项你认为中职生（高中生）应具备的心理素质。第三部分也是开放式问卷，自己评价自己的心理素质的好坏，并具体分析好的表现和不好的表现。
2.2 施测及调查结果
参加测试学生为金昌市理工中专一年级学生206名和金川公司第二高级中学高一学生205名，问卷全部有效。
2.2.1 心理素质成分的重要性排序和分析项目的筛选
对问卷第一部分分析，将两个被试群体数据文件合并汇总，对各题项进行平均分排序。排在前五位的依次是：人生观、自制力、自我评价、坚持性、心境。按照得分大于50%为保留依据，舍去了“需要”这一个项目。所剩21个项目内部一致性系数符合统计要求。可以作为下一步分析的对象。
2.2.2 中职生和普高生应然心理素质成分重要性排序对比分析
对问卷第二部分分析，中职生十项应然心理素质成分重要性排序为：自信、有活力、乐观、有爱心、冷静、兴趣广泛、友好相处、自我调节、行为和谐、性格不偏激。普高生十项应然心理素质成分重要性排序为：自信、自制、有理想、主动、思维敏捷、有恒心、有创造力、专注、对自己严格、有自主意识。
从中可见，中职生应然心理素质成分更多倾向于有活力、爱心、乐观等“情绪情感系统”，表明中职生在人际交往以及生活中更多体现出亲和力，更加圆滑，社会适应性更强，还倾向于性格柔和、行为不偏激等“个性系统”，反映出中职生喜欢交际层面的生活内容，普高生更多倾向于思维、理想，创造力、专注等等适合于学习与升学的“认知系统”和有恒心、毅力、自制等的“意志系统”，这反映出中职生情商优于智商，而普高生智商优于情商的心理素质特点。
2.2.3 中职生和普高生实然心理素质自评对比
对问卷第三部分分析，70%中职生自认为心理素质较好，20%自认为一般，只有10%自认为不好。自评较好的认为自己好的方面表现为自信、有符合实际的目标、人际关系和谐、有正确的人生观、豁达、乐观、有爱心、能包容别人等等，自评为不好的认为自己自控能力差、习惯不好，性格偏激。而对于普高生，30%自认为心理素质好，20%自认为心理素质一般，50%自认为心理素质不好，自评好的认为自己积极、上进、能力强、为适应考试型，意志坚强等，自评为不好的则认为自己心理承受能力低，受挫能力低、缺乏应变能力、自卑等。由此可见，中职生实然心理素质表现好者依然突出表现为好的“情绪系统”和“个性系统”，普高生实然心理素质表现好者突出表现为较好的“认知系统”和“意志系统”，跟前面应然心理素质成分分析一致。表明中职生生活重心在于与学习无关的其他方面，普高生生活重心明显倾向于学习。
3 中职生心理素质结构探析
心理素质可以从两个角度去定义，一是从身心角度，即与生理素质相对应来定义，认为心理素质就是人的心理品质，这一定义与个体的背景因素无关；二是从特定的职业特定的人群应该具备的心理素质出发来定义心理素质。本研究对心理素质的定义采用两种心理素质观糅合的方法。即不论什么人群，其心理素质均应指其心理品质，而心理品质应该是一个动态综合系统，该系统应该包括四个维度，即知、情、意、个性，这样分类的主要目的在于便于任何人的自我评价。“知”维度中应该包含自我意识和自我以外的思维能力、记忆能力、想象能力、观察能力、创造能力六个成分；“情”维度中应该包括心境、激情、应激三个成分；“意”维度包括自觉性、坚持性、果断性、主动性四个成分；“个性”维度较为复杂，包括兴趣、动机、理想、信念、价值观、人生观、世界观、气质、性格九个成分。
用所收回问卷的40%进行探索性因素分析，结果认为，中职生心理素质系统包括四个子系统，分别是认知系统、情绪情感系统、意志系统、个性系统，各个子系统所包含的因子数见表1。再用所收回问卷剩余的60%做验证性因素分析，结果发现，两个模型的拟合性较好，进一步验证了本研究的构想效度。
总之，从心理素质结构的底层成分出发，采用定性研究方法将其维度划分为认知系统、情绪情感系统、意志系统和个性系统符合心理学研究方法，也适应普通人理解水平，可以将其简称为知、情、意、个性，简单明了，方便他评与自评。中职生与普高生在应然心理素质成分调查中表现出明显差异，前者倾向于从情绪情感系统和个性系统层面去诠释心理素质，后者倾向于从认知系统和意志系统层面去诠释心理素质，实然心理素质成分则反映出中职生更喜欢与爱心、乐观、有活力等与情感生活有关的素质，普高生更喜欢自制、坚持等与得到好成绩有关的素质。通过探索性因素分析和验证性因素分析最终确定了中职生心理素质结构，可以为未来职业学校心理健康教育提供一定参考。
参考文献
[1] 李瑛.大学生心理素质结构研究[D].武汉：华中师范大学硕士学位论文，2005.
[2] 李绍明.女大学生心理素质模型的探析[J].科技信息，2008（24）.
[3] 燕国材.论心理素质及其教育[J].云梦学刊，2000（3）.
[4] 刘华山.试析学生心理素质特征与结构[J].教育研究与实验，1999（4）.
[5] 张大均，冯正直，郭成，等.关于学生心理素质研究的几个问题[J].西南师范大学学报：人文社会科学版，2000（3）.
刚毕业的高职生在今后的职场的发展，一般情况下取决于学生在校期间掌握的专业知识、专业技能等职业能力和职业过程中表现出来的职业道德、职业态度、职业精神等职业素质。
一、职业素质的界定
关于职业素质的定义很多，本文结合高职学生实际，将职业素质定义为学生在校期间职业素质的养成，主要包括职业道德、职业意识和职业行为习惯，本文重点探讨职业行为习惯中的敬业、主动、沟通与合作、吃苦耐劳等职业素质的养成对学生就业竞争力的影响。
二、职业素质对学生就业竞争力的影响
我系部从2011级酒店专业开始进行《酒店职业素质修炼》的课程教学，来推动学生职业素质的养成，人力资源管理专业从2013年开始进行职业素质的养成教育，经过几年的培养和对毕业生就业情况的调查，职业素质的高低对学生就业竞争力影响明显，具体如下：1.调查企业需要学生具备的职业素质。在每年9-10月份对学生就业企业开展就业调查的过程中，通过对11级、12级、13级（14、15、16年）三级学生的实习和就业单位的调研来看，几乎所有的企业都非常注重学生的职业素质，发展潜力，在选拔学生时都强调学生的综合素质的可塑性和职业素质，其中列举的调查项目归纳总结如下：所有学生工作岗位都强调敬业、吃苦耐劳、积极主动、沟通能力、团队合作等五方面的职业素质。这五方面职业素质的培养，是我们提高学生就业竞争力的指导方向。2.人力专业优秀毕业生职业素质模型与就业竞争力的关系。人力专业从08级专业开设以来，涌现了一批批优秀毕业生，截至到今年6月份为止，毕业5年之内，副总以上2人（09级人力曾凯旋培训公司副总，10级人力王勇茶企业公司副总），总监级以上5人（08级3人、10级2人），经理级以上20余人的具体详细调查发现，在他们身上体现的敬业、积极主动、吃苦耐劳、沟通和合作等几方面的职业素质特别明显，形成了专业优秀毕业生的一个成功素质模型，这些职业素质，极大提高了他们在职场的就业核心竞争力，笔者以这些作为成功素质模型进行推广应用于人力专业学生的职业素质培育过程中。
三、高职学生职业素质的创新培育路径
1.“双体验”，在“职业素质”培育模式上的创新。“职业素质”的培育需要融入人才培养的全过程，同时也需要载体，人力专业从企业的最需求的敬业、主动、专注、严谨、精益求精等职业素质出发，与企业共同开发，编制基于工作过程系统化的课程内的教材，连续开设4学期《职业素质修炼》课程来逐步培育高职学生的职业素质。职业素质修炼课堂上通过4节连上来完成“准职业人”的“职业精神”任务工单，通过游戏互动、角色扮演、现场辩论、经验分享等多种形式的课程体验，极大激发了学生学习的“职业素质”的热情。传统意义上，我们将课内教学和课外实践分离，而且学生的真实体验感不强，学习积极性也不高，学生培育效果自然低下。我们经过多年探索、实践，提出基于工作过程的课堂教学体验和课外实践体验（以校内茶艺馆、旅行社、文印社等真实运营的实训基地为载体）相融合的“双体验”模式。即课堂体验的敬业精神，在运营的实训基地进行实践体验敬业，这种双体验模式有效的激发了学生的学习热情，使“职业素质”的培育质量大幅提高。同时，我们也积极组织学生通过参加“大学生潜能和素质户外拓展训练”、微笑礼仪、阳光晨练等活动体验职业人的“职业精神”——专注、坚持；2.“团队学习”，在“职业素质”学习组织方式上的创新。在现代企业需要团队作战，而90后团队精神的缺失的背景下，项目组在学习组织方式上下功夫。每5-7人组建一个学习团队，并要求体现专业特色的团队队名、口号、LOGO设计等团队PK展示。在校期间，无论是课堂的“职业素质修炼”教学，还是丰富多彩的课外“职业素质”实践活动，都要求按照团队的组织形式来开展和进行，这种形式，极大提高了专业学生的团队意识和职业素质。3.“师徒制”，在“职业素质”培育主体上的特色与创新。第一，校内导师制：每个团队可以选择1名自己喜爱的老师作为在校期间的团队导师，导师将带领团队完成在校期间培育“职业素质”的各项课外实践体验活动。第二，校外师徒制：学生实习阶段，团队导师变成学生的校内实习指导老师，同时学生与企业管理人员或老员工建立“师徒制”，企业师傅除了指导学生的职业技能，更重要的是培育学生的“职业素质”，并且师傅要求在实习手册上对学生职业素质相关项目的进行评价。4.校园考核重过程和企业考核重结果的双重评价体系，评价高职学生“职业素质”的培育效果上的创新。我们专业打破了传统的重结果，轻过程的考核方式，实现了校园过程考核和企业结果考核相融合的考核方式。校园课堂《职业素质修炼》课堂中教师对学生的每个细节都进行记录和评价，《综合素质教育》对学生参与的每项课外实践都有参与分记录。企业对学生“职业素质”的考核体现在最后学生实习手册中以结果为导向的企业评价表。总之，经过笔者对人力资源管理专业连续3年的毕业生就业情况中企业和毕业生的调查，得出了企业和毕业生双方认为的应该具备的职业素质，并经过例证说明了这些职业素质对学生就业竞争力的影响，最后提出了四个方面来培养高职学生职业素质的途径，取得了良好的效果，为其他专业对学生职业素质的培养提供了新的路径，有一定的推广意义。
参考文献：
[1]潘燕.高职学生职业素质修炼[M].浙江大学出版社.2015.
一、问题的提出
技工学校是专门培养技术工人的中等职业学校，是我国职业技术教育的重要组成部分。它肩负着培养直接面向建设、生产、服务、管理的一线技术性工人的责任。随着经济全球化深入发展，对一线技术工人的综合素质要求日益严格，然而，目前的技工教育要么还在沿用初中的教学内容和教学方法，要么选择高校的教学形式，不能很好地满足用人单位需求和学生自我锻炼的需要。近几年高职院校的职业实用性体育研究和高中模块体育教学研究取得了很好的经验，职业实用性体育有效促进学生就业能力，这对我们技工学校的课程改革来说有很好的借鉴意义。通过对技工学校职业实用性体育教学模块设计进行探讨，为技工学校体育与健康课程改革进行有益探索与尝试，对构建出适合技工学校专业特色的体育课程服务。
二、相关概念的界定
1.技工学校：
技工学校是专门培养技术工人的中等职业学校。始称工人技术学校，是在建国初期劳动部门举办的专业训练班的基础上发展起来的。
2.职业实用性体育：
丁宗伟在《试论高校体育教学与未来职业需求的结合》中认为：职业实用性体育是为使各专业的学生能够更好地的适应未来职业的工作和生活环境，有目的进行职业所需要的体质、身体运动技巧与技能的锻炼，并开展有关理论知识的教育，
王苹聪在《中职体育课中进行职业实用性体育教学的理论探索》中定义为：职业性体育是指适应和发展用于各种职业生产劳动与之相关体能、心理与道德所需要的一种针对性较强的体育活动。郭玉军、尉宏等在《实行职业实用性体育是中专卫校体育改革的切入点》中定义为，职业实用性体育，（VPPE）即“vocation practicability physical education”对VPPE的理解就是利用体育具有多功能的特点，在发展一般身体素质的基础上，注意加强对学生特殊身体素质、技能的发展和培养，以便更好地进行职业活动，并利用在校期间所学的实用性体育知识进行合理有效的体育锻炼，达到强身健体预防职业病的目的。
翁惠根在《体育教育改革与实践的探索》一书中说：职业实用性体育课程是指以“准职业人”（学生）目前所学专业、未来可能从事的第一职业岗位所需要的职业工作综合能力为工作任务， 以培养和完善从事职业岗位所需要的职业体能、终身体育锻炼能力、职业特殊身体素质和综合职业素质为教学目标而进行有计划、有目的的教育内容的总和。【1】
结合以上分析，本人对职业实用性体育定义为：“职业实用性体育”是体育与健
康课程的一部分，即在发展一般身体素质的基础上，结合学生专业特点，注意加强对学生未来职业特殊体育知识、技术、技能、身体素质、职业保健知识的教育，达到强身健体和预防职业病的目的，更好地服务于未来职业的一种教育活动。
3.模块设计：
“模块”（module） 的概念是1976 年由美国教授迈克尔・加扎尼加（Michael Gazzaniga）提出的。“模块”一词最初是建筑、家具、计算机等行业的术语，后来才被广泛地应用于其它各技术领域。所谓模块，是为了实现明确的教育目标，围绕某一特定主题，通过整合学生经验和相关内容而设计相对完整、独立的学习单元。 在《普通高中课程方案（实验）》中对“模块”的概念定义为：每一科目有若干模块组成，模块之间既相互独立，又反应学科内容的逻辑关系。每个模块都有明确的教育目标，并围绕一特定内容，整合学生经验和相关内容，构成相对完整的学习单元。【2】
设计：《现代汉语词典》的解释是 “在正式做某项工作之前，根据一定的目的要求，预先制定方法、图样等”。戈登.罗伦德在《设计与教学设计》中认为：“设计就是为创造某种具有实际效用的新事物而进行探索”。
本文认为：职业实用性体育教学模块设计就是依据学生专业特点，进行岗位核心身体素质分析以后，对教学内容充新分解和构建，围绕核心身体素质所进行的一种教学设计和教学安排。
三、模块设计理论构想
1.模块设计流程图
模块设计属于教学设计，目的就是解决教学中的现实问题，也是对教学资源和程序作出有利于学习的安排。根据毛振明、于素梅两位老师的《体育教学计划编制技巧与案例》获得启发，从技校学生就业现实出发，在对体育教学过程中各因素进行分析，然后进行目标的制定，教材的选取，场地器材的使用，将教学各要素有序，合理安排，形成教学方案的过程。
图1 体育教学模块设计流程图【3】
2.技工学校职业实用性体育教学模块设计具体方法
2.1确立研究专业与该专业的职业实用性体育核心身体素质。技工学校专业分类众多，每个专业的职业实用性性体育教学内容也有所不同，所以我们要首先确立某个专业为研究对象，分析专业特点，专业职业实用性身体素质类型。
2.2确立该专业学生进行模块内容的选择。可以是某个运动项目，也可以是某几个运动项目，这取决于后续研究的能力水平。
2.3对该专业学生进行模块分析，包括学习需要，学习内容，学习者等分析。
2.4进行具体模块设计。包括教学目标的设计，教学策略的设计，教学媒体的设计，教学过程设计等。
2.5进行模块评价部分的设计。包括教学设计的评价部分，一般采用形成性评价和终结性评价相结合的办法进行。
2.6对模块进行反馈与修正。为了保证模块设计的有效和完整，要在实践中进行检验，根据反馈问题要及时进行修正。可以咨询专家和实际操作相互配合，以保证设计的科学性。
总之，技工学校职业实用性体育教学模块设计属于技工学校体育与健康课程改革的一部分，在技工学校还是起步阶段，我们要借鉴高职院校职业实用性体育和高中模块教学的成功经验，结合技工学校自身特点，设计出适合我们技工学校的职业实用性体育教学模块设计，为技工学校的体育与健康课程改革作出我们技工人的努力。
参考文献
