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随着现代医学观念的进步，以及医院服务理念的更新，为了最大限度的挽救生命，考虑到患者的需求，我国许多医院都引进了先进的医疗设备，设置了重症医学科（intensive careunit，ICU）。ICU是一个为重病人聚集，病情多变，先进医疗仪器集中的地方，这对ICU医护人员提出了很高的要求，作为一名ICU医护uoduo人员除了具备丰富的专业知识，熟练的技术操作和高尚的医德之外，还应具备优秀的心理素质。这也是做好ICU工作所必备的条件。
1 ICU医护人员心理健康受损的具体表现
医院运转中医护人员的作用不可忽视。作为医院主要的服务主体，医护人员在医院管理和运行中的各个方面都发挥着并不可替代的作用。但是，作为有机的生命本体，医护人员自身的心理健康问题日渐突出。尤其是在重症医学科工作的医护人员，平常接触的治疗对象以及工作环境的巨大压力，对他们的心理和身体造成了极大的压力。调查发现，在ICU工作的医护人员心理压力最大，主要的心理问题有：
1.1 ICU医护人员有患焦虑症状的倾向 焦虑症明显的表现特征是医护人员容易出现焦虑现象，经常性的担心自己有某些工作没有做好，担心自己工作中疏漏的出现。这是一种神经症状，重症医学科的医护人员由于随时可能面对重症患者的病情突变，见惯了生老病死，导致他们对自身工作常怀忧惧心理。这种焦虑症临床表现出来的症状主要有无缘故的担心和恐惧，并出现植物神经症状、肌肉紧张和运动不安状况。结合他们的工作环境和工作内容，这种精神症状主要是由于医护人员长期在紧张的环境中工作，每天面对的是濒临死亡边缘的患者，并且重症科为了及时的拯救病患，到处都安装了报警声，再加上其他医疗设备的机械声等所造成的心理压力和噪音影响，以及医护人员有可能面临的医疗纠纷等问题，都严重困扰着医护人员的工作，再加上医疗法律的介入，更使得医护人员的工作压力空前增大。在工作中，医护人员既要努力保证自身护理水平的正常发挥，又要面对重症科嘈杂的环境以及众多的衍生问题，导致他们精神上的压力和紧张，从而引发了焦虑症。伴随着这种症状的是医护人员常感到头晕、头痛，并且容易出现情绪波动，经常感到缺乏力气，从而影响正常工作水平的发挥，造成恶性循环。相关的数据调查表明，大多数的医护人员的睡眠质量明显低于正常水平。睡眠作为有效地休息方式，对人体机能的正常发挥至关重要。但是目前我国医护人员的需求比较大，导致现在医院的ICU护理人员的工作强度较大，又无法保障他们的收入，再加上随时可能出现的医患关系问题，导致医护人员心理障碍的出现，若不及时的采取措施，这种状况有可能逐渐增加。
1.2 ICU医护人员患抑郁症 抑郁症是一种更为严重的精神疾病，属于情感精神障碍的一种。这种症状主要的表现为医护人员日常生活中不明原因的情绪低落，反应迟缓，懒于运动，失眠健忘等。调查数据显示，我国医疗系统中医护人员患抑郁症的比例在25%-30%，远远高于普通人的概率，其中ICU医生中抑郁症的可能性更高。论文笔者根据这种状况，对工作所在医院的182名重症科的医护人员心理健康状况进行了调查与分析，结果发现这组人员的抑郁自评量表和焦虑自评量表的得分高于其他组，说明了他们更容易患有抑郁症这种精神疾病会严重的困扰医护人员的正常工作和生活，影响他们的身体状况。作为医疗服务的重要主体，医护人员的精神状况直接关系到医疗服务的水平，尤其是重症医学科的医护人员，如果患有抑郁症状，在工作中极易出现问题，严重时会导致医疗事故的发生。
1.3 ICU医护人员强迫症状 这种精神疾病也经常出现在医护人员队伍中。强迫症的主要表现是医护人员经常会出现自我可定和自我否定的现象，对于工作中的判断反反复复，并且伴有强迫自身做或者不做某件事的倾向。这种状况主要是指患者心理明白自身所担心的问题毫无意义，但是仍然无法阻止自身的行动，越是企图控制这种不合理的行为，效果越是恶劣，并且会产生心理的恐惧和痛苦感。
医护人员患强迫症的危害是很大的，由于这种症状的特点，会严重影响他们的形象，导致医患关系紧张，有时候会导致医护人员自身学习能力的下降甚至短暂的丧失，给他们的工作造成严重的影响。调查表明，ICU医护人员的心理问题发病率高达51.2%，其中以强迫症最为多发。
2 ICU医护人员心理健康损害的因素
ICU医护人员容易产生心理和精神疾病是由原因的，主要可以从以下几个方面进行研究：
2.1 主观因素
2.1.1 ICU医护人员职业心理压力过大 医院的重症监护室主要收治的是危重患者，医护人员尽全力抢救生命的同时，也不可避免的会面对死亡。虽然借助先进的医疗设备和医术，许多患者得以治愈，但是医护人员自身肩负的责任，使得他们在面对死亡时仍感到压力巨大，觉得自身需要更多地付出，自我压力不断增大，最终会由于压力过大而出现心理问题。
2.1.2 ICU医护人员个人心理调节能力差 鉴于工作中的生老病死现象，医护人员有时候会产生一种无力感，对自身的工作丧失信心，导致工作时情绪低沉，悲观失望；同时由于工作技术的要求在不断地增加，压力加大的同时，有些医护人员无法及时的调整自己的情绪，长期的陷于消沉的心理状况之中，导致他们对苦难的退却和屈服态度，对自身工作热情的消退和悲观失望。同时，作为医护人员，在治病救人的同时，却无法自医。许多医护人员即使觉察到自身的精神出现了状况，但是却不注意调整，认为只要自己注意一下，或者在坚持一下，就能克服但是精神类的疾病单靠克服是无法完全治愈的。再加上国内的医院尚未建立起针对医护人员的心理调节机制，医疗机构对这一群体的精神健康关注度也较少，对他们缺乏有效的心理疏导。这些状况都导致医护人员自身抗压力、自我心理调节能力的下降。
2.2 客观原因 主要是指重症医学科的医护人员所面对的工作内容和工作环境的压力所致。
2.2.1 行业风险原因 在重症科中收治的患者大都是随时可能出现生命危险的患者，这种情况导致了医护人员工作时的特殊性。他们的每一个操作细节都有可能影响到患者的生命安全。医护人员不仅要保证自己的服务态度，还要拓展自己的专业治疗技术。否则轻微的偏差都有可能引起医疗事故。这种高负荷的压力比将会影响医护人员的精神状态。同时面对惯常的生老病死，医护人员要竭力保持冷静的态度，理性的处理患者的问题，这些都会加剧他们的精神压力。
2.2.2 医疗纠纷对ICU医护人员的心理压力 治疗对象的特殊性导致医护人员在承受着巨大地心理压力的同时，还要关注患者家属的情绪问题。尤其是国内《医疗事故处理条例》颁布实施后，对医护人员的影响更大了。一旦发生医疗纠纷事件，不仅会关系到他们自身的工作，而且要承担法律责任。
3 ICU医护人员心理健康受损的预防措施
3.1 加强自身业务素质而适应专科发展 作为医护人员，在有责任的对待自身工作的同时，也要保持一颗平常心，才能冷静的进行治疗。在医院这一特殊的环境中工作，医护人员要注意积极保持乐观的心态，尽心服务的同时要尽量保持自我身心的平衡。虽然面对的压力比较大，但是只要摆正自己的心态，专心提高自己的医术，用心的为患者服务，就能有效地减少工作中的偏差，提高自己的治疗水平，和谐调整医患关系。
3.2 ICU医护人员定期心理干预 针对ICU这一特殊工作环境的从业人员进行心理健康测试以便及时干预，给予心理辅导，以职业的、科学的心态面对工作中所发生的事情。要有承担、迎接风险的勇气，回避、逃避风险只能使自己处于落后、淘汰的境地。
3.3 ICU医护人员掌握有效的沟通技巧 ICU医护人员在拥有扎实的业务能力的基础上，同时应掌握一些必备的沟通技巧。ICU医护人员应善于在交谈中发现患者及家属的心理预期，注意谈话的方式和语气，要站在患者及家属的角度，注入思想和情感的交流。对于那些治疗元望或因某种原因放弃抢救者，ICU医护人员要带有极大的同情心来告知病情。另外在诊疗过程中，ICU医护人员应及早与患者沟通，尊重患者的知情权，让他们对诊疗行为和医生有更多的理解，增强彼此间的信任。进而正确引导患者及家属了解医学所具有的风险性，科学地认识和正确对待医疗活动的局限性，以此减少不必要的纠纷。
呵护老人的心理主要有6大方法：
1.丰富业余生活 老年人应当根据身体条件和兴趣爱好，把生活内容安排得充实些，如练书法、种花草、养禽鸟、读书报、看影视剧等，这样既可舒展心情，又能珍惜时光，使生活更有意义。
2.活到老，学到老 老年人学习不单纯是为了学习新知识，更重要的是通过这种方式，使自己不感到寂寞。
3.保持乐观情绪 老年人要对生活充满信心，尽量做到心胸开阔，情绪乐观，发挥自己在知识、经验、技能、智力及特长上的优势，寻找新的生活乐趣。
4.学会摆脱烦恼 生活既丰富多彩，同时也充满坎坷和烦恼，人生本来如此。大风大浪已经经过，不必为小事烦恼，更不要处于郁闷状态，要通过各种途径把坏情绪及时释放出来，保持一份好心情。
5.家庭和社会关心 家庭和社会的关心是老年人心理健康的外部环境和必要条件，生病时需要照顾，不但给予物质上的关心，更重要的是给予心理上的理解和支持。
6.加强人际交流 老年人要经常和好友聊天谈心，交流思想感情，在集体活动和人际交往中汲取生活营养，使自己心情舒畅、生活愉快。（朱凤）
教你识破假笑
要想当个人际高手，学会察言观色、捕捉人的面部表情是很重要的技巧。
美国“微表情”研究专家保罗・埃克曼发现，任何一种表情，如果持续的时间超过5至10秒钟，很可能是假装的。比如微笑，发自内心的微笑通常只能持续2至4秒；而假笑因为缺乏真实情感的激励，不知道应该何时结束，一般会持续超过5秒，同时脸部的肌肉会显得僵硬，有些不自然、不对称。
愤怒、狂喜等强烈情感伴随的面部表情，持续时间常常更为短暂。比如惊讶，真实的惊讶一闪即过，一般不超过一秒。如果努力做出眼眉上挑、嘴巴张大的样子，并且保持好几秒，可能是“假惊讶”。
（北京安定医院精神科博士 杨蕊）
导致老人加速衰老的因素
人都很怕老，但是有些因素会导致人更快的衰老，那么导致加速衰老的原因是什么呢?下面我们就来了解一下。
一、抑郁：
有一些老年人心理比较脆弱，面对衰老的客观事实既无奈又惧怕，这种心态假如不及时调整，很容易引起抑郁。这种抑郁比较顽固，极容易使人丧失生活的兴趣，令人感到疲乏。因此这种人极容易情绪激动，动不动就发火，经常自卑自责、自怨自艾，严重者可有自杀的倾向和行为。
二、怕死：
他们害怕衰老的核心是恐惧死亡。惧怕谈论死亡，不敢探视患者，怕经过墓地和听到哀乐，甚至看见一只死亡的动物也备受刺激，不敢正视。
[中图分类号] R-331 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）05（c）-0008-05
Development of kits of a single antibody sandwich ELISA for quantitative detection of human nerve growth factor
XU Chun-E1 WANG Wei2 DING Rui2 JI Hong2 WU Xiao-hong3 TIAN Guang3
1.Beijing Center for Drug Evaluation，Beijing 100061，China；2.Beijing Institute for Drug Control，Beijing 100053，China；3.Institute of Microbiology and Epidemiology，Military Medical Science Academy of the PLA，Beijing 100071，China
[Abstract] Objective To prepare mouse monoclonal antibody against human nerve growth factor （hNGF） and develop an ELISA kits for quantitative detection of hNGF. Methods BALB/c mice were immunized with recombinant human nerve growth factor antigen and Freund′s complete adjuvant，the monoclonal antibody against hNGF was prepared by the technique of hybridoma，and then the ELISA detection kit for rapid detection of hNGF content was established. Results 1 hybridoma cell line secreting monoclonal antibodies against hNGF was obtained.1 ELISA kits for the detection of hNGF content was established.The recovery rate of the detection method was 85%-105%，the sensitivity was 0.63 ng/ml，the coefficient of variation was less than 10%，and the peculiarity was good. Conclusion A monoclonal antibody against hNGF is successfully prepared，a rapid and precise ELISA kit is established for detection of rhNGF content.
[Key words] Human nerve growth factor；Monoclonal antibody；ELISA for quantitative detection
神经生长因子（nerve growth factor，NGF）是由其效应神经元支配的靶组织合成和分泌的一种对神经细胞生长发育、分化、新陈代谢等方面具有重要调控作用的活性多肽[1-5]，影响外周和中枢神经系统某些神经元的存活和分化，在神经系统的发育以及损伤和修复中具有重要作用[6-10]。多项研究[11-14]成果表明，神经生长因子具有广泛的临床应用前景。
目前，定量检测人神经生长因子的方法有R&D公司的ELISA试剂盒，该试剂盒通过酶联免疫反应对样品中的NGF进行定量，但是，R&D试剂盒是以昆虫细胞表达的重组人神经生长因子为标准品，其以包被抗体包被酶联板，加入抗原后以生物素化的检测抗体结合所捕获的抗原，然后再加入链亲和素-HRP结合物反应，洗涤后显色。由于该试剂盒在双抗体夹心ELISA的基础上采用了生物素-链亲和素放大系统，虽然敏感度高，但操作繁琐，检测过程耗时长，一个实验过程需要6 h完成，而且其标准曲线范围为31.25～2000.00 pg/ml，因此检测高浓度样品时需要高倍稀释，这导致检测结果误差很大。
因此，亟需开发一种快速简便、灵敏度适中且特异性强的hNGF快速检测试剂盒来解决现有试剂盒存在的问题，以推动有关人神经生长因子的研究、药品的开发及临床应用[15-21]。本研究开发了仅基于一株小鼠单克隆抗体的夹心ELISA试剂盒，可以完全满足以上要求。
1 材料与方法
1.1 材料
重组人NGF制品和rhNGF蛋白标准品由北京华安科创生物技术有限公司提供，为精确定量的rhNGF纯品；mNGF标准品（苏肽生，舒泰神药业有限公司）为市售产品；BALB/c小鼠由北京大学医学部实验动物中心提供；可拆卸式96孔板、浓缩洗涤液（20×）、终止液、封板膜、自封袋均为常规实验室耗材，试剂级别为分析纯即可；微量移液器、漩涡混匀器、电热恒温培养箱、超微量微孔板分光光度计均为市售实验室常规检测仪器。
1.2 抗hNGF单克隆抗体的制备
1.2.1 BALB/c小鼠免疫 选取5只雌性BALB/c小鼠，将重组人神经生长因子抗原与弗氏完全佐剂混合，乳化完全后皮下注射，每只小鼠的免疫剂量为80 μg。首次免疫后，间隔2周及3周，将rhNGF抗原与弗式不完全佐剂进行乳化后重复免疫2次，小鼠尾部取血，测血清效价，选取效价高的小鼠进行融合试验。融合前3 d，腹腔加强免疫1次。
1.2.2 细胞融合及杂交瘤细胞筛选 超净台内无菌环境下取免疫BALB/c小鼠的脾脏研磨制成脾细胞悬液，用RPMI 1640培养基洗涤2次，收取1×108脾细胞与2×107～5×107骨髓瘤细胞SP2/0混合于一支50 ml融合管中，补加RPMI 1640培养基至30 ml，充分混匀。1000 r/min离心10 min，将上清尽量吸净。在手掌上轻击融合管底，使沉淀细胞松散均匀。用1 ml吸管在1min左右加预热至37℃的50% PEG 2000（pH=8.0）1 ml，边加边轻轻转动，肉眼可见有颗粒出现，缓慢加入RPMI 1640培养基至20 ml。1000 r/min离心6 min，弃去上清。前10 d在HAT选择性培养基中进行培养，之后直至第1次克隆化完成前选用HT培养基培养。2周后用间接酶联免疫吸附法（ELISA法）检测融合细胞的阳性率，选出阳性值较高的孔，经有限稀释对检测出的阳性杂交瘤细胞进行克隆，连续克隆化3次使阳性克隆孔的阳性率达2次100%后，选出阳性值高的孔转孔并扩大培养并冻存。
1.2.3 抗hNGF单克隆抗体腹水的制备及抗体纯化 采用体内诱生法大量制备单克隆抗体。取6～8周龄的健康BALB/c雌性小鼠，腹腔注射石蜡（0.5 ml/只）。1周后，杂交瘤细胞离心洗涤，用PBS调整细胞数至1×106个/ml，每只小鼠注射0.5 ml。5～7 d后，待小鼠腹部增大，采集腹水。腹水离心后收集上清，用HITRAP Protein A HP预装柱纯化抗体，分装后于-70℃保存。
1.3 抗hNGF单克隆抗体性质鉴定
1.3.1 抗hNGF单克隆抗体亚类鉴定 采用Rapid ELISA Mouse mAB Isotyping Kit鉴定单抗的类及亚类，按照试剂盒说明书操作。
1.3.2 抗hNGF单克隆抗体亲和力常数测定 采用捕获抗体的方法，用GE公司生物分子相互作用分析仪Biacore 3000检测抗hNGF单克隆抗体的亲和力及结合动力学。
1.3.3 抗hNGF单克隆抗体特异性鉴定 采用Western blot鉴定单克隆抗体的特异性，抗hNGF单克隆抗体蛋白的纯化效果用SDS-PAGE鉴定。对rhNGF和mNGF进行SDS-PAGE 电泳，电转印后，用制备的单抗（1 μg/ml）进行孵育，AP标记的羊抗鼠IgG作为二抗（1∶5000稀释），按Western blot的一般步骤操作。
1.4 定量检测hNGF蛋白含量的酶联免疫试剂盒制备
试剂盒按常规方法开发并组装，方法简述如下。
1.4.1 酶标板包被 将抗hNGF单克隆抗体用50 mmol/L、pH=9.5的碳酸缓冲液稀释后加入酶标板的各孔，每孔100 μl，吸附过夜，用吐温-磷酸盐缓冲液洗板，再用吐温-磷酸盐缓冲液封闭过夜，甩干后晾干，即获得单克隆抗体包被的酶标板。
1.4.2 酶标单克隆抗体制备 试剂盒中的酶标单克隆抗体可以用辣根过氧化物酶（HRP）标记抗hNGF单克隆抗体来制备，制备方法如下：①以NaIO4-乙二醇法进行HRP的氧化，达到终浓度10 mg/ml。②在碱性碳酸盐缓冲液（50 mmol/L，pH=9.5）中透析6 h，实现HRP对抗hNGF单克隆抗体的标记，反应结束后用新鲜配制的1 mg NaBH4溶液终止反应，再对PBS透析过夜。③用饱和硫酸铵沉淀，获得纯化的HRP酶标抗hNGF单克隆抗体。
1.4.3 辅助试剂 酶联免疫试剂盒中，辅助试剂包括酶联反应底物溶液、显色液、反应终止液和清洗缓冲液，用于试剂盒的辅助试剂如下。①底物显色溶液：50 mmol/L磷酸-枸橼酸缓冲液（pH=5.0）配制的3%过氧化氢溶液为底物溶液A，浓度为0.1 mg/ml的四甲基联苯胺（TMB）甲醇溶液为底物溶液B；②反应终止液：2 mol/L硫酸；③清洗缓冲液（20倍浓缩液，20×）：20 mmol/L PBS（pH=7.4）配制的0.05%吐温20溶液；④样本稀释液：2%小牛血清白蛋白（BSA）。
1.5 酶联免疫试剂盒检测hNGF蛋白含量的方法
检测hNGF蛋白含量的步骤简述如下。
1.5.1 制备标准曲线 ①抗原-抗体反应：在试剂盒提供的酶标板的微孔中分别加入25 μl不同浓度（0、7.8125、15.6250、31.2500、62.5000、125.0000 ng/ml）的rhNGF蛋白标准品，接着每孔加入75 μl酶标试剂混匀，37℃孵育30 min。重复洗板操作4次。②显色反应：每孔依次加入底物溶液A，显色液B各50 μl，显色10 min，每孔再加入50 μl反应终止液结束反应。③比色：将空白对照孔的吸光值调零，用酶标仪在450 nm双波长下测定OD值并记录。④使用直线线性拟和方式进行数据处理，以各标准品的OD450值为纵坐标（Y轴），各标准品的浓度为横坐标（X轴）作图，得到标准曲线。
1.5.2 样品检测 待测样品与标准品同时加样，检测步骤相同，检测样品的OD值减去空白对照的OD值之后，带入标准曲线方程中得到样品NGF浓度，整个检测可在1 h左右完成。
1.6 定量检测hNGF含量的酶联免疫检测试剂盒的评价
1.6.1 准确性 取一批已知浓度110 μg/ml的rhNGF蛋白溶液，在规定范围内根据测定结果进行评价。分别取稀释蛋白含量为10、50、100 ng/ml浓度的供试品溶液各1份，按ELISA检测试剂盒检测步骤进行6次独立试验。用由浓度为10、50、100 ng/ml的标准品所检测得到的吸光度回归标准曲线得到的值进行回收率比较。
1.6.2 精密度 随机抽取2块包被后的板，取一批已知浓度110 μg/ml的rhNGF蛋白溶液，在规定范围内根据测定结果进行评价。分别取稀释蛋白含量为10、50、100 ng/ml浓度的供试品溶液各1份，按ELISA检测试剂盒检测步骤进行6次独立试验。计算每次测定结果，求出均值（x）、标准差（s）和相对标准偏差（RSD）。
1.6.3 检测敏感度 根据上述实验操作结果计算本试剂盒的检测敏感度。
2 结果
2.1 杂交瘤细胞株的建立
选取的5只小鼠经重组人神经生长因子连续3次免疫后，尾部取血测定每只小鼠血清效价。图1结果显示，5只免疫小鼠的血清效价有明显差异，其中2#小鼠的血清效价最高，选取其进行细胞融合试验。
图1 免疫的5只小鼠血清效价图
所选小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合处理后，采用间接ELISA法检测，选出阳性值较高的融合细胞；采用有限稀释法对阳性杂交瘤细胞进行克隆化，共获得13株杂交瘤细胞；采用体内诱生法大量制备单克隆抗体，将所得的13份纯化抗体进行筛选，最终获得高效稳定分泌抗hNGF单克隆抗体的杂交瘤细胞株6G3可用于检测试剂盒的建立，并对其进行低温保藏。
2.2 单克隆抗体性质检定
经鉴定细胞株6G3的IgG亚类为IgG1型，轻链为κ。对所获得单克隆抗体的亲和力结合动力学进行分析，结果见表1。结合速率常数Ka值为1.41×106/（M・s），提示抗体与抗原反应迅速；解离速率常数Kd值为2.48×10-4/s，提示抗原抗体复合物结合稳定；反应平衡常数为1.76×10-4 M，提示结合反应进行完全。
表1 Biacore检测抗hNGF单克隆抗体与rhNGF抗原的亲和力
将图2用Gel-Pro软件分析电泳条带的结果，经计算抗体纯度>90%，能够满足实验要求。对rhNGF和mNGF进行SDS-PAGE 电泳，电转印后，进行Western blot实验，结果见图3。
由于人的NGF与小鼠NGF之间同源性高达89.1%，并有资料证明人与小鼠NGF之间存在免疫交叉反应。由图3结果可见，在Western blot鉴定过程中也得到了相同的结果，Western blot检测结果显示与mNGF存在微弱交叉反应。
图2 抗hNGF单克隆抗体纯化后的SDS-PAGE电泳图谱
2.3 检测试剂盒的制备
根据实验，最终的检测条件是：样品稀释至标曲范围后加入25 μl/孔和酶标抗体75 μl/孔，37℃孵育30 min，洗板3～5次，显色剂A、B混合后100 μl/孔37℃避光显色5～10 min，加终止液50 μl/孔，450 nm波长下读取光吸收值。标准曲线绘制以标准品7.8125、15.6255、31.2500、62.5000、125.0000 ng/ml的浓度为横坐标，其对应的A450值为纵坐标，得到线性方程，其线性关系良好（r2=0.998）（图4），样品定量通过带入标准曲线方程计算得到。
图4 ELISA试剂盒检测重组人NGF的标准曲线图
2.4 检测试剂盒的验证
采用本试剂盒对3份样品进行检测，结果见表2。平均回收率为88.43%，在85%～105%之间；对10、50、100 ng/ml浓度的18次检测结果进行统计，x 分别为8.9252、44.2828、87.4650 ng/ml，s分别为0.3980、2.4547和4.0366，RSD分别为4.46%、5.54%和4.62%，精密度结果显示RSD≤10%，检测灵敏度为0.63 ng/ml。综合以上数据，试剂盒在方法学验证方面表现为回收率略低（
3 讨论
NGF作为神经系统重要的多肽因子，可以促进损伤或病变神经元的再生，是目前用于治疗神经损伤非常有效的一种药物，对NGF制剂的研制具有巨大的经济效益和社会效益。近年来，随着基因工程技术的日益提高，NGF的获得途径也从最早的动物组织提取发展到现在的真核细胞重组表达，在满足日益增长的临床药物需求的同时，新技术的发展也带来了一些新的问题，即在细胞大规模培养进行NGF表达及后期纯化过程中，为满足生产过程中的质量控制，亟需一种快速、稳定、精确的定量方法来监控生产中NGF含量的变化。
ELISA法是高通量筛选和定量检测生物技术药物常用的一种方法，其利用抗原抗体特异结合进行检测，分析灵敏度高，检测速度快。针对NGF含量的检测目前已有商业化的ELISA检测试剂盒提供，但在实际应用中因其检测过程耗时长、标曲线性范围窄、存在数据反馈不及时、检测结果误差大等问题，并不能很好地解决所面临的问题。
本研究对ELISA检测方法进行了重新开发，使用重组人神经生长因子蛋白抗原对动物免疫，通过细胞融合和筛选获得阳性杂交瘤克隆，通过该杂交瘤细胞制备得一株抗人神经生长因子的单克隆抗体，该单克隆抗体特异性强、敏感性高，可以在免疫组化、ELISA等多种方法中使用。由于重组人NGF的活性形式为同源二聚体，相同的抗原表位至少有2个，利用单株抗体分别包被酶标板并制备酶标抗体，最终组装成夹心ELISA试剂盒，所建立的ELISA检测试剂盒能够很好地解决上述问题。
按照国家对药品检测方法的相关要求，新开发的检测方法需要对其进行系统的方法学验证，因此本研究对组装试剂盒进行了相关方法学验证，验证数据显示，采用该试剂盒对样品中的rhNGF进行定量检测，不仅操作简单，而且具有线性好、灵敏度高和特异性强的特点，能够快速准确地计算出待测样品中rhNGF的含量。在实际应用中，通过本试剂盒检测能够真实地反应出发酵液和rhNGF纯化样品中rhNGF的存在水平，尽管Western blot显示该抗体与mNGF存在部分交叉反应，但是制成试剂盒后进行检测，与mNGF没有交叉反应。本试剂盒的建立为NGF大规模生产的质量控制提供了有力支持，能够为推动rhNGF的临床研究做出相应贡献。
[参考文献]
[1] Chaves RN，Alves AM，Lima LF，et al.Role of nerve growth factor （NGF） and its receptors in folliculogenesis[J].Zygote，2012，21（2）：187-197.
[2] Yang SR，Li W，Lu YQ，et al.Effects of GM-CSF，IL-3，and GM-CSF/IL-3 fusion protein on apoptosis of human myeloid leukemia cell line TF-1 induced by irradiation[J].Acta Pharmacol Sin，2004，25（1）：68-75.
[3] He GQ，Guo J，Duan JC，et al.Expression of nerve growth factor precursor，nature nerve growth factor and their receptors during cerebral ischemia-reperfusion injury[J].Neural Regen Res，2011，6（22）：1701-1708.
[4] Fan BS，Lou JY.Recombinant expression of human nerve growth factor beta in rabbit bone marrow mesenchymal stem cells[J].Mol Biol Rep，2010，37（8）：4083-4090.
[5] Counts SE，Mufson EJ.The role of nerve growth factor receptors in cholinergic basal forebrain degeneration in prodromal Alzheimer disease[J].J Neuropathol Exp Neurol，2005，64（4）：263-272.
[6] Stefan MG，Karl Heinz S，Sten H，et al.Basal serum land reactivity of nerve growth factor and brain-derived neurotrophic factor to standardized acute exercise in multiple sclerosis and controls[J].J Neuroimmunol，2003，138（1-2）：99-105.
[7] Sadeu JC，Doedée AM，Neal MS，et al.Neurotrophins （BDNF and NGF） in follicular fluid of women with different infertility diagnoses[J].Reprod Biomed Online，2011，24（2）：174-179.
[8] Noh H，Seo H.Age-dependent effects of valproic acid in Alzheimer′s disease （AD） mice are associated with nerve growth factor （NGF） regulation[J].Neuroscience，2014， 266：255-265.
[9] De Rosa R，Garcia AA，Braschi C，et al.Intranasal administration of nerve growth factor （NGF） rescues recognition memory deficits in AD11 anti-NGF transgenic mice[J].Proc Natl Acad Sci U S A，2005，102（10）：3811-3816.
[10] Di Fausto V，Fiore M，Tirassa P，et al.Eye drop NGF administration promotes the recovery of chemically injured cholinergic neurons ofmouse forebrain[J].Eur J Neurosci，2007，26（9）：2473-2480.
[11] 李剑波，潘海桦，姜云水，等.人瘤病毒重组蛋白疫苗酶联免疫检测法的建立及其应用[J].中国现代应用药学，2015，32（1）：10-14.
[12] 孙亮，于志新，赵风强，等.蛋白酶K单抗研制及其双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立[J].免疫学杂志，2015，31（2）：161-164.
[13] 马健，倪超，王海鹰，等.幽门螺杆菌单克隆抗体的制备及其检测应用[J].现代食品科技，2015，31（4）：228-233.
[14] 杨芳，邢，于海英，等.抗-HCV酶联免疫吸附实验试剂的评价[J].中国输血杂志，2009，22（5）：380-382.
[15] 张晓丽，帅敏，张玲，等.影响酶联免疫吸附试验的检测结果的因素和操作时的注意事项[J].中国医药指南，2011， 9（10）：176-177.
[16] Luechi NW，Demas A，Narayanan J，et al.Real-time fluorescence loop mediated isothermal amplification for the diagnosis of malaria[J].PLoS One，2010，5（10）：e13733.
[17] 宫苗苗，曾妮，程朝飞，等.狂犬病病毒基质蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立[J].中国共患病学报，2013，29（1）：17-22.
[18] 吴延功，徐天刚，王志亮，等.重组N蛋白抗原检测PRRSV抗体ELISA的研究Ⅰ.ELISA方法的初步建立及其标化[J].中国兽医学报，2005，25（4）：339-342.
[19] Kerr P，Chart H，Finlay D，et al.Development of a monoclonal sandwich ELISA for the detection of animal and human Escherichia coli O157 strains[J].J Appl Microbiol，2001，90（4）：543-549.
关键词：
健康 便携 家庭观念
中图分类号：TB476
文献标识码：A
文章编号：1003-0069 （2015） 02-0101-02
一 研究背景
“随着科技的发展、社会的进步，人们的经济水平迅速提高。因此，人们对生活的品质有了更高的要求，对于食品安全和食品健康格外关注。对于健康的、高品质的食物，人们不惜花费时间和金钱。比如近几年逐渐走人人们视野的豆浆机、榨汁机以及各种食物调理机，人们会在厨房花费一定的时间来应用这些机器制作食物，目的就是健康、安全和美味。”也是对现有产品的一种改良设计，“产品改良设计是对产品进行适度修改的方法，具有过渡性质。一般属于跟随型的采用防御策略的企业为了控制成本，避免过大研发投入和市场风险，尽量不对产品进行全新设计，只是让设计师在有限的设计空间里展开设计。对设计师来说，由于受到成本的限制，在造型、材质和工艺等方面可供选择的余地不大彳艮难展开设计。只有充分运用设计手段，调动各种设计元素和加工手段，在产品设计中多用添加法、减少法、组合法和表面处理等方法进行设计，才能够给产品带来差异化，增强产品质感，提升产品档次从而获得极大的产品附加值。”
二 家庭式多功能外带餐盒设计前期调研：
（一）生活形态调研分析
经过近两个月的时间，针对上班族和在校生午休进餐期间的观察和调研后，结果显示：绝大多数的上班族和学生午饭期间都是在就近的小餐馆或者食堂就餐，主要原因是要考虑到价格和口味、快捷等条件。就餐条件基本都是嗜杂的人来人往的场所，有一些甚至是“三无餐馆”。也有极少部分人采取自己带饭的采访调研结果显示：如果加热方便、容易清洁更愿意自己带餐的，一部分学生家长也表示，如果加热方便希望孩子自己带饭，吃得健康营养、放心，还比较经济实惠。
针对这款餐盒的设计，我们考虑到，可以参考与单身族相关的厨具、餐具等产品设计，因为都是一个人的量，出发点相似，可能会有共通的地方，可能会对设计更有帮助。
（二）材料、相关技术调研
1 关于材质，我们了解到一般常见的餐盒有：玻璃硅、塑料、铁质三种，其中玻璃质的餐盒在材料上是最安全的，但携带却不方便。铁制餐盒则是容易导热，使用起来容易烫手。塑料材质的餐盒有多种，pp料是国际安全级材料，pp5是耐高温可以进行高温加热，也比较便于携带，但是材料的环保性并不高。
我们了解到市面上的餐盒主要分为：微波炉饭盒、保温饭盒、一次性饭盒、电热饭盒、玻璃饭盒、折叠饭盒、电子饭盒。基于餐盒设计的主要核心为外带餐盒设计，于是我们选择了便携性更强的电子饭盒为设计原型，进行进一步的改良优化及创新。同时通过对餐盒的调研我们总结得出，市面上餐盒普遍存在的一些问题及优点：优点为设置可拆卸通气阀门，餐盒内部分层，有沥水功能便于携带蔬果等，存在的问题有保温效果差，餐盒自身较重，材质易碎，容易有异味，餐盒容量较小，不可微波炉加热等问题，对我们进行餐盒设计也提供了参考和需要重点关注的问题。
2关于多功能技术，通过对餐盒的设计我们也希望能够引来人们对于健康饮食的关注，饮食是日常必不可少的，但往往也是最容易让人忽略的，希望通过一些技术手段而让人们重视健康饮食。于是我们也对一些现有的可以加入到餐盒中的科技技术进行了调研：
（1）电热技术：恒温加热PTC热敏电阻具有恒温发热特性，其原理是PTC热敏电阻加电后自热升温使阻值进入跃变区，恒温加热PTC热敏电阻表面温度将保持恒定值。
（2）食品热量分析技术：采用近红外光谱技术直接测量各种类型食品、饮品的热量，即卡路里值。包括中西菜肴、营养配餐、夹心面点、休闲小吃、饮品、酒类等皆可以在几分钟内得到结果，除了热量指标，同时还可以得到蛋白质、脂肪、碳水化合物等指标。
（3）近红外光谱检测技术；配备以多年来建立的数据库资源和独特的计量算法，可以快速检测各种类型的样品，得出热量指标即卡路里值。
三 家庭式多功能外带餐盒
基于家庭式多功能外带餐盒的考虑，我们将产品设计定位为学生、上班族等，生活工作较为忙碌或需要带餐外出和想要健康饮食的群体。通过对定位人群的了解，我们得知学习工作较为忙碌的人群通常会忽略健康饮食，因为饮食不规律、不健康而导致身体健康出现问题，对此我们也在产品设计中增添了多种功能，建议并督促使用者健康饮食。参考了中国古代食盒和日本便当盒的设计。因为这样的设计既将食物区分开，也非常便于携带，四四方方的结构也利于加热、热量检测等技术手段植入的实现。四家庭式多功能外带餐盒设计的意义
现有产品功能上不完善，不能满足一家人的多种需求，也不能保证饮食上的安全，各种“洋快餐”充斥着我们的生活，外带餐盒品质没有保证该项目能弥补市场上的空白，还能倡导健康的生活方式。个人的饮食习惯和喜好不同，有些不良的习性也会对身体健康有很大的影响，此项目所研究的餐盒可以为人们提供一个健康饮食的参考和提醒，从而间接地改善人们的生活方式和形态。
使产生设计上新思考从而设计出更利于各个家庭成员使用的产品，通过功能的区分，创新设计，将新设计的理念和和谐家庭观念应用到实际生活中。
五 产品展示（图1，图2）
六 相关家庭式多功能外带餐盒设计现状
目前，市面上普通的餐盒仅仅是为了承载食物，而且产品质量不能保证，有些产品只注重便携，有些高端产品能够提供加热和生熟区分的功能。通过调查，发现有些产品已经开始渐渐注重分析人们的生活形态从而进行设计，而不是为了设计一个产品，却让人们适应产品，在餐盒这个市场上，一些产品已经能做到各个分区，独立工作和定时加热的功能，所以不难看出，人们的生活形式对产品的设计研究影响深远，有些为保证生活健康的产品和研究也逐渐增多，最终目的都是提供人们更好的生活方式。但产品单一仍然无法实现满足不同年龄人群多样的需求，尤其是针对老年人和孩子的功能上的完善。这也是市场上需要的产品。
家庭式多功能外带餐盒的创新点
“一盒多能”。根据不同年龄人群的生活状态体质需求，在餐盒上增加食物成分和热量识别的系统，将放入餐盒的食物进行分析，为不同年龄层的家人准备的食物所合营养物质的设计，提醒人们健康的饮食合理搭配。餐盒增加存放生病所需药物和营养品的区域以提示饭前、后服用。各个食物存放区功能独立，为食物提供一个适合的存放环境，保证食品卫生。
“家庭式”。以家庭为核心，根据两口、三口、四口、五口的家庭结构的需要选择产品，独立的产品组合到一起之后，能形成一个完整的产品体系，就像一家人早上各自出门，最终回归家庭，使家庭观念深入人心。
“家庭产品系统呈现出高技术、自动化、信息化的特征。传统的家庭产品都是以低技术为支撑，多利用天然的资源、简单的原理，至多增加一些精雕细琢之类的工艺，操作简单直接，易于控制，能够根据人的生理和心理需求很容易地调整产品的工作状态，很友好地为人所用，更为重要的是人的活动参与其中，不仅能够调动机体活性，而且还能影响个人的精神和家庭氛围。”“看看充斥每个家庭的各式‘机器’就不难发现，原来有人做的都被‘物’接管了。在不久的将来，人甚至不用拨动旋钮，只要用脑子想想（脑电波），‘物’就会工作了。”
七 家庭式多功能外带餐盒的应用前景预测
这位拥有27亿美元资产的食品大亨已87岁高龄，他认为自己非常有可能活到125岁，因为过去25年来他的饮食都严格遵照健康食谱，此外他还斥资5亿美元建立了一所先进的食品研究中心。在过去很多年中，他的身体一直保持着近乎完美的健康状态。默多克说：“几十年来我的身体一直没什么毛病，腰不酸、背不痛、头不疼。”
【第一幕】妻子英年早逝 默多克重视健康
默多克的母亲在他17岁时去世，享年42岁。1967年，默多克在40多岁时迎娶了第三任妻子加布瑞尔。默多克非常爱她，他们生了两个儿子，生活非常幸福。默多克说：“我们的兴趣爱好都是一致的，在这个世界上你很难找到这样一个人。”然而1983年，加布瑞尔被诊断为卵巢癌晚期，虽然没有有效的治疗方法，但默多克非常希望她能恢复健康。默多克尝试去研究健康食谱，这也成了他此后一直坚持的饮食方案。
很多癌症都与环境有关，加布瑞尔的家族并没有卵巢癌的病史，因此默多克坚信生活方式是令加布瑞尔患上癌症的元凶。默多克说：“如果那时我知道健康饮食的重要性，就能保住我妻子的命，或许还能让我母亲活得更久一些。”1985年，与默多克结婚18年后，43岁的加布瑞尔去世。
尽管此后默多克还结过两次婚，但每次婚姻都不长久，现在他已独身十多年了，他常常提到“我的妻子”，这个妻子指的就是加布瑞尔，他的家里也到处摆满了加布瑞尔的照片。正是由于对妻子加布瑞尔的爱，默多克才致力于研究和追求健康饮食。
【第二幕】默多克的健康食谱 果蔬为主
默多克的健康食谱中包含20种果蔬，他每天喝两三次鲜榨果蔬汁，以补充植物纤维和维生素。他每天还吃大量的海鲜、蛋白、豆类和坚果，以补充因严格控制奶制品、肉类和禽类的摄人所缺少的蛋白质。此外，他的食品黑名单上还有酒类、糖和盐。
虽然默多克身高只有1.72米左右，且头发花白、满脸皱纹，但他精力充沛，这令他显得较为年轻。在家里时，他每隔20分钟就会离开座椅一次，拿木块给壁炉添柴。他把体重保持在127斤，但他从不计算饮食的卡路里含量，不认为严格控制食物热量能延长寿命。不过他确实相信体重超重会缩短寿命，也经常提醒身边的人们注意控制体重。
去饭店吃饭时，默多克都会把黄油碟推给服务员，让他们“把死亡拿下餐桌”。如果他的雇员和朋友在咖啡、牛奶里加糖，他会问他们“为什么要自杀”。如果有人没把健康食品吃完，他会责问他们“挥霍了多少维生素”。当然，默多克的食谱里也有甜食：用黑巧克力和核桃制成的不合面粉的曲奇饼干，不是用糖来增加甜味，而是用蜂蜜。
世界上有很多人用各种方法来追求长寿，默多克的方式相对主流，比起前沿科技，更为依靠个人的自律。他吃一些果蔬的茎和皮，这看起来是有点奇怪，但这种怪异并不具有危险性。他的饮食以果蔬为主，严格控制动物油脂的摄入，但依据医学专家的推荐通过食用豆制品等来保证蛋白质的摄入量。
默多克很注意每天保持一定的日晒时间，这对于维生素D的吸收来说非常关键，但为了防止皮肤癌也不能日晒过多。他每天争取晚上11点前上床睡觉，睡眠时间至少为6小时。也许他的健康方案里最富争议的是他拒绝服用任何药物，他认为这实在没什么必要。
【第三幕】默多克剑指125岁很多人不看好
87岁的默多克相信自己能够打破吉尼斯世界纪录，活到125岁。但他的医生称，尽管默多克有着理想的血压、干净的血管和良好的肌肉张力，但这并不一定能让他活到125岁。他们指出，默多克直到60多岁时才开始采用健康饮食，并且遗传基因对人的寿命所起的作用通常胜过生活习惯所起的作用。尽管默多克的父亲活到了90多岁，但他的母亲早逝，姐妹也都不长寿。
现在普通美国男子的平均寿命仅为75.5岁，且一般来说，活到87岁的美国男子有望再享有5.25年的寿命。
寿命研究专家S·杰·奥尔善斯奇表示：“没有记录显示，有任何人为方法能从根本上延长人类寿命。”针对默多克的健康饮食习惯，奥尔善斯奇称类似方法只是“让寿命超过遗传潜力”的可能途径，但“遗憾的是，他也很有可能无法活到125岁”。
默多克食品研究中心成员、杜克大学心脏病专家罗伯特·卡利夫认为，虽然默多克的饮食方案值得称赞，但也并未被证明是长寿的“助推器”。他说：“想要知道食用某种食物是否能延长寿命。需要通过对整整一代人的研究才能得出答案。”
【第四幕】花钱建研究中心 望所有人饮食健康
默多克表示希望消灭糖尿病、心脏病、癌症等健康杀手，他身边的科学家们说。默多克非常乐观，他相信自己能打败这些疾病。他虽然没能救活加布瑞尔，但他希望能拯救他人。他的食品研究中心不仅是为他个人服务的，而是要把他所知道的健康饮食向大众推广。
在《福布斯》杂志最新的全美400名富豪榜单中，都乐食品公司所有者默多克排名第130位，资产约为27亿美元。凭借丰厚的财富，默多克将自己的健康饮食方案推向了大众。最近几年来，他斥资5亿美元建造了北卡罗来纳研究中心，目的是为了通过科学证明，有针对性地摄取品种丰富的果蔬能延年益寿。
这个研究中心非常宏伟，让周围的建筑都黯然失色，其内部是配备了尖端设备的世界级实验室。研究中心的中部是大卫·默多克核心实验室，这个实验室的地板和墙壁铺满了白色大理石，天花板上有一幅巨型彩色壁画，画中包含了默多克食谱中的24种主要食品。这些食品呈环状分布，围绕着一只展翅的雄鹰，它就象征着默多克本人。
【关键词】连锁餐饮
“小蓝鲸”
品牌战略。
品牌餐饮是经营业绩和社会口碑优良、知名度甚高，并形成相当规模，得到社会一定范围认可的餐饮经营。品牌餐饮是成功餐饮经营的一种体现。餐饮品牌的共同特征是：经营连锁化、价格大众化、菜式特色化、管理系统化、服务及环境风格化。
品牌意识的出现是餐饮市场激烈竞争的直接后果，作为一种更高级别的发展模式，品牌塑造在中国的餐饮业中发展的程度还远远滞后于像麦当劳、肯德基、德克士、必胜客等国外餐饮企业。究其原因，中国的餐饮业品牌战略还存在着许多问题：品牌营销意识较为淡薄，综合服务素质的竞争和挑战激烈，餐饮企业品牌营销方式落后，品牌经营片面依靠广告，餐饮品牌文化内涵滞后，品牌建设评价机制形式化等等。
一、“小蓝鲸”发展过程中体现的品牌战略。
武汉小蓝鲸健康美食酒店管理有限责任公司是一家经营中式健康餐饮的全国连锁企业，曾荣获“中国餐饮百强企业”、“全国首家营养餐厅”、“全国十佳餐饮连锁企业”、“全国十佳酒家”、“全国商业信用企业”等多项殊荣，现有20家连锁店，员工4500余名，连续六年蝉联湖北餐饮销售第一。
从小蓝鲸的发展过程可以看到，小蓝鲸在发展初期属于路边作坊式的餐饮店，靠着上菜快、份量足、价钱廉、服务优、经营活的经营方式，积攒了口碑与原始资本。随着市场竞争的日益激烈和消费者对饮食要求的提高，小蓝鲸从家庭作坊向餐饮企业转型，转向规模化、高档次发展。凭着对餐饮市场的仔细分析，小蓝鲸大打健康牌，定位于“健康餐饮”，确立了“举健康旗、炒环保菜、打品牌战、走连锁路”的品牌战略。“吃出健康来”的健康饮食概念，简洁易记，又具有明确的指导性，与同行业形成了明显的差异。
二、“小蓝鲸”对我国餐饮品牌战略的启示。
1、树立品牌战略意识，科学定位规划品牌。
品牌是消费者对产品的感知，品牌的形成不仅仅取决于产品本身的特性，更取决于顾客对产品特性的理解和认知。餐饮业的品牌战略不同于其他商业模式，频繁性消费的特点决定了品牌与消费者更为密切的联系，同时品牌的行业特性更是确立了品牌建设要以消费者为中心的地位。在商品逐渐同质化的市场环境下，产品之间的质量差异越来越小，消费者的注意力逐渐转移到产品的品牌传播、品牌特色、品牌形象以及品牌维护上来，并且以此作为自己消费的标准。小蓝鲸在竞争日益激烈的市场形式下，毅然转变经营方式，树立品牌意识，打出自己的品牌，走品牌之路，才有了今天的成就。可见，思想决定出路，树立品牌战略，才是餐饮业的出路所在。
品牌的科学定位是品牌能保持旺盛生命力的基础。品牌必须具有鲜明的个性以及独特的差异性优势。品牌定位应深究品牌的内涵和本质，包括品牌的核心与灵魂、品牌的价值、品牌的长期目标和最终目标、品牌的核心顾客群等等。此外，企业还需要对品牌进行规划，以适应市场需求。餐饮企业塑造品牌之初，应该分析餐饮企业创建之初和发展过程中思考的种种品牌远景，然后认真梳理，确定一个清晰合理的餐饮企业品牌远景，明白餐饮品牌究竟是什么，要走向何处，而且这个餐饮企业的品牌远景必须经过深谋远虑，具有相应的高度、宽度和广度，能够引领整个餐饮企业品牌，以及各个加盟连锁店品牌的健康持续发展。小蓝鲸公司定位只做餐饮业的战略主要表现在：首先实施了“小南京”更名“小蓝鲸”，使企业拥有一个受法律保护的商标，如今已是湖北省著名商标品牌。针对发展中的新问题，公司经研究决定实施“强内、兴外、攻远”的战略，结构上采取“减同增异、错位经营、办特色店”的策略，2006年11月小蓝鲸连锁店数达到20家。公司投资3000多万元扩建装修，建成小蓝鲸的旗舰店，成为武汉唯一的商务餐厅和第一婚礼店堂，并以美食天地定位，运用全国连锁店的原料优势，引进月月美食节的概念，现已举办了海南美食节、湘西美食节、韩国美食节；汉阳店以归元寺作为卖点，引进素菜穿插其间，让人既能品尝小蓝鲸的健康美食又能品味佛教文化；街道口店以海鲜超市作为特色，经营水平比调整之前有大幅度的提升。
2、定位餐饮服务消费对像。
任何一个餐饮企业都不可能满足所有客人的需求，这就需要我们有效地分配和利用资源来满足我们所圈定的或特定的目标市场。没有唯一适合任何餐饮企业的最好目标市场，只有特别适合餐饮企业目标、机会、资源和能力的目标市场。小蓝鲸对激烈的餐饮市场同质化竞争进行了冷静分析，结合中餐自身的特点，推出具有不同特点的子品牌，确定目标消费群体是“寻常百姓家”。
随着生活水平的进步，经济时代的跟进，快节奏的消费者、白领阶层、更多的家庭都选择外出就餐。尤其在近年，家庭市场已经成为餐饮企业促销的新目标。随着社会人均收入的提高、消费观念的更新以及带薪节假日的增多，越来越多的家庭走进了餐馆和酒楼。家庭外出就餐的比例增多，大众化成为我国餐饮市场的主流。由此可见，小蓝鲸目标定位准确。
3、加强品牌文化建设，深化餐饮品牌文化内涵。
品牌的背后是文化。“如果你想了解美国文化，那你只要抽一支万宝路香烟，吃一份麦当劳汉堡，喝一瓶可口可乐，穿一件真维斯足矣”。餐饮品牌文化是在清晰的餐饮品牌定位的基础上，利用各种内外部传播途径形成观众对品牌在精神上的高度认同，从而形成一种文化氛围，继而通过这种文化氛围强化客户的忠诚度。品牌文化包括企业的名称、产品的名字、菜单的设计、餐厅环境、公关活动、品牌管理方式及营销方法，还有品牌文化的灵魂、核心。
小蓝鲸营造一个气息浓郁的“食文化”氛围，每月花数万元办两份报纸，一份为《美食新潮》，主要是传播健康美食知识，定期送给所有的老顾客和其他消费者。另一份为《小蓝鲸人》，主要宣传介绍企业内部的各类英才，营造一种企业文化氛围，增强企业内部凝聚力，充分调动每个职工的积极性和创造性。同时开发出了《小蓝鲸健康饮食导向系统》软件，为小蓝鲸品牌注入了科技含量，为日后实施品牌战略，进行连锁经营打下了坚实的基础，也充分体现了“吃出健康来”、“饮食讲科学、营养示均衡”的企业文化。为了进一步提升企业形象，小蓝鲸充分运用公关手段宣传企业，并积极参与公益事业。
4、加强餐饮品牌的推广与传播。
品牌推广在品牌识别和品牌最终形象之间起着中介和桥梁的作用。不管品牌识别有多清晰，品牌定位再准确，若离开了强有力的品牌推广，也无法实现最终的品牌形象目标。餐饮企业品牌的推广过程，是品牌形成的过程，也是消费者对品牌的逐步认识过程。因此，品牌推广可以说是品牌战略的关键环节。
餐饮企业品牌推广应该在品牌核心价值统率下进行整合营销推广。整合营销推广的核心思想是：以整合企业内外部所有资源为手段，以消费者为核心，充分调动一切积极因素进行全面的、一致化的营销。如实行针对目标市场选择恰当媒体，加大品牌宣传力度、加强企业整合宣传力度、扩大品牌知名度、提升餐厅文化等等一系列措施。小蓝鲸以其独特的品牌定位———“健康餐饮”，不仅满足了消费者的新需求，更是当地第一家打健康牌的餐饮企业，所以小蓝鲸的品牌定位在本质上与其他竞争者区别开，具有鲜明的个性，为消费者熟悉。
餐饮企业在品牌推广过程中应注意以下四点：一是企业素质是品牌的根本；二是要注意企业与外部环境的沟通，维护好企业与消费者、社会公众、政府以及其他机构的关系，努力提高企业的知名度和美誉度，树立起良好的企业形象；三是主动运用法律武器保护自己，对餐饮企业来说，菜品的配方是最重要的商业秘密；四是要避免只重视媒体宣传、促销等短期行为，而应重视品牌的持久维护，以创新提升品牌，不断地充实品牌的内涵。
5、打造品牌质量体系，建立餐饮配餐软件系统。
品牌的核心是具有能让消费者满意的质量。餐饮企业品牌的形成是对产品、服务、环境、文化等多种因素的整合，但其基础是产品。质量体系主要包括产品质量、环境质量、服务质量三个方面。其中产品质量是核心，环境质量是保证，服务质量是基础，三者相辅相成，缺一不可。
小蓝鲸在培植品牌的过程中始终把严格的质量作为工作重点来抓，用一流的环境、一流的服务、一流的产品质量参与餐饮市场的竞争。在企业内部管理上实施“99+1=0”的零起点管理方式，把好采购、生产、出品和服务的每一道关口，每道生产程序都制订定了详尽的制度。企业领导还经常深入到经营第一线，具体监督和指导，层层把关，卡住不合格的产品，以保证产品质量。正如小蓝鲸董事长刘国梁说“：质量不仅仅是我们企业的生命，而且体现了生产者和经营者的人格。我们所从事的是健康产业。因此，我们要有健康的人格心理。”
1996年，公司在全国首倡“饮食讲科学、营养求均衡”和“吃出健康来”的健康饮食理念，研制出填补国内该项领域空白的“电脑配餐”软件系统。目前，该系统已为顾客免费提供了电脑配餐服务8000多万人次，深受顾客欢迎。在长期不懈的健康餐饮实践中，公司总结提炼出“健康饮食五级台阶”：第一级台阶，双筷双勺、公私分明，能有效防止病菌交叉感染，既卫生健康，又符合中国人的传统礼节，被权威人士誉为中式分餐法；第二级台阶，电脑配餐，根据地理环境、气候因素、饮食习惯的不同，通过电脑对个人的资料进行分析，再进行针对性的配餐和饮食指导；第三级台阶，三个不自由，即不让空腹饮酒，以免伤胃，不让多点菜，以防浪费，不让乱点菜，以免中毒；第四级台阶，健康顺口溜，即“争蜂吃醋，吃黑喝红，终生不断奶，餐餐吃青菜”；第五级台阶，健康九字经，即“素为纲、动经常、心舒畅”。
【参考文献】
[1]武汉小蓝鲸官方网站[EB/OL].http：//xlj.com.cn/，2010-12-06.
[2]吴涛、斯琴毕力格：我国连锁餐饮业发展的品牌战略[J].北方经济，2010（4）。
项目介绍：
一片特制的烤纸，放在专用的设备上，滴上几滴油，将切好的五花肉、牛排、羊羔肉等平放在纸上，随着温度的升高，纸上的肉片慢慢出油、变色、蜷缩，浸在纸上的油脂将肉煎得滋滋作响，一股浓厚而奇妙的肉香四溢开来，令人胃口大开、垂涎不已！ 这时，就可以将烤好的肉在特别调制的蘸料中蘸一下，放进嘴里细细咀嚼，嫩滑的烤肉绝对让你胃口大开。在品尝烤肉的同时，将土豆块、茄子块、鱼块、香菇等置于烤勺中，放进烤架的第二层进行烘烤，风味独到、回味无穷，令人难以忘怀！
就是这样与众不同的烧烤方式，造就了独一无二的味道，让万千食客鱼贯而至，成为当前最受大家追捧的健康美食之一。
项目优势：
一、全新卖点 绝无仅有
地道韩国纸上烤肉的餐馆在国内几乎没有，这一核心卖点如同一个强力磁场，足以把所有消费者吸引到店中；
二、独特美味，闻香止步
原创的纸上烤肉技法，经典的美味配方，不仅能让消费者闻香止步、过口不忘，这也是别人抄袭不了、模仿不了的核心优势；
三、异国风情，健康饮食
韩今成纸上烤肉，有荤有素有主食，完全符合现代健康饮食结构模式；
四、草根价位，人气消费
卖点虽然新奇，口味固然经典，但是韩今成纸上烤肉的价格并不贵，三五老友小聚、家庭成员聚会，一桌下来也只要百八十块，不但吃得爽，而且买单心不慌。这样的低价美味，就是要让大家吃得过瘾、吃了还想，当然能引来爆棚的人气！
五、低成本，高利润
韩今成纸上烤肉“绝”，只是绝在其制作手法和专用配方上。制作原料几乎全部可以在当地采购，成本非常低廉，配方、设备则由总部超低价格集中配送，再加上无需厨师、无需大量人员、管理简便等，成本低、损耗小，保证了令人眼热的巨大利润空间。
六、现场观摩，实地培训
韩今成纸上烤肉店在武汉专门开了一家直营店，供投资者培训使用。投资者可以在店中跟班学习，掌握经营和管理中的关键细节，亲眼所见、亲耳所闻、亲身体验。
时过境迁，新时代的经济飞速发展给我们带来了充足的食物供应，我们不再为获得食物而担忧了。但是，我们开始为“如何吃，吃什么”而忧心忡忡了。我国居民在膳食结构上存在三大问题：第一，城市居民的畜肉及油脂消费过多，谷类食物消费偏低。第二，城乡居民钙、铁、维生素A等微量元素摄入不足。第三，蔬菜摄入量明显减少，绝大多数居民仍没有形成经常进食水果的习惯，尤其是男性。居民摄入大大超过身体每日代谢所需的热能，造成多余热能转化为脂肪储存，超重和肥胖人数迅速增加。这些问题直接导致我国慢性疾病发病率迅速增加。目前，中国糖尿病患者超过9.000万，高血压患者高达1.6亿。正如我们一些50岁以上的朋友所感叹的，”年轻的时候正是需要吃的时候。却既没钱也没有东西可吃。现在有钱了，也有了各种想吃的东西，却因为体重超标、血糖高、血脂高而要限制吃喝了”。
我想，有这种感叹的人绝不是少数。看看下面的真实数据，就知道这些年中国人的健康都有些什么变化了。我国2006年公布的居民营养与健康状况调查结果显示，慢性病已经成为城乡居民死亡的主要原因，到2002年，每1，000个死亡的人中，城市有85人死于慢性病，农村有80人死于慢性病。世界卫生组织于2006年指出，如果不采取措施，在未来十年中，中国将有8，000万死于慢性病。中国卫生部公布的调查结果表明，膳食的不合理是造成多种慢性病的行为危险因素之一。简单地说就是，这些慢性病最明显的特征是与饮食有明显的关系。主要表现为，肉类和油脂消费的增加造成膳食脂肪供能比的快速上升，以及谷类食物消费的明显下降。食盐摄入居高不下。
我们该怎么办?传统的膳食模式已经不能适应新时代的健康需求。我们需要重新思考我们的饮食文化。重新梳理我们的生活方式，重新定义我们的饮食价值观。我们需要一个革命性的思维，一个以健康为目标的行为准则。原卫生部副部长王陇德院士认为，中国人迫切需要来一场膳食革命。是的，我们需要的膳食革命，是一个饮食文化的革命，是生活方式的革命。不健康饮食和慢性病的增加有着密切的联系。通过健康饮食来降低慢病的经济负担也是我们的社会责任。因此，膳食革命也是社会责任的革命。这在经济高速发展的今天具有更重要的实践意义。
“十个拳头”原则：即肉：粮：奶豆：菜果=1：2：2：5（以重量比计）。
你的拳头总在你的身边，由于性别、身高、体重的不同，每个人的拳头大小也略有不同，可以将它作为一个非常方便的“量具”，建议你经常根据自己拳头的大小来粗略估计每天各类食物的进食量（指生食量）：
不超过：一个拳头大小的肉类（包括鱼、禽、肉、蛋）；
相当于：两个拳头大小的谷类（各种主食，包括粗粮、杂豆和薯类）；
要保证：两个拳头大小的豆、奶制品（各种豆制品、奶制品）；
不少于：五个拳头大小的蔬菜和水果。
一个拳头大小的生食物重量范围在120 ～200克，平均为150 克。大家可以根据自己的拳头大小大致确定食物需要。
《健康饮食歌》
膳食宝塔有五层，十条指南记心中。
讲平衡，食多样，谷类为主搭粗粮；
菜果蔬，绿红黄，薯类也要多尝尝；
肉禽蛋，要适量，鱼虾鸡鸭比肉强；
喝牛奶，饮豆浆，奶豆制品促健康；
饭，是要日日食，顿顿吃的。
如今，有一个流行的说法，你吃的食物决定了你是谁。婴儿从6个月起开始添加辅食，这一生要吃上万顿的饭。每一餐所含的热量，碳水化合物、蛋白质、脂肪、膳食纤维、微量元素、矿物质的含量，食材搭配产生的营养功效――这些细分开来微不足道，组合起来却颇具影响力的因素，都关乎孩子长大成人后的身高、体重、智力发育以及健康状况。与其人到中年开始关注养生知识，不如真的赢在“起跑线”上。
食育教育是指：为建立儿童健康的饮食模式，面向儿童和其抚养者、教育者所开展的饮食教育干A工作。目的是逐渐改善孩子的身体状况，尽可能地避免因不健康饮食、不科学饮食而带来的身体亚健康和疾病状况，努力提高新一代国民的健康素质。试想，如果没有一个强有力的体魄，孩子们长大成人以后又怎能发挥自己的光和热呢？
食育活动的直接对象是孩子，而重点对象却是普罗大众，是那些对孩子们的成长起到至关重要作用的成年人。家长是孩子最亲密的人，其一言一行对孩子认知的影响是潜移默化的。学校是孩子们学习知识、完善自我的乐园。老师们教书育人，为孩子起到榜样的作用。如果去学校组织一场食育活动，相关领导不能认同、老师们不支持、家长们不了解，那这个活动开展的意义又何在呢？
现在的孩子，大多不存在能不能“吃饱”的问题，主要是“吃太好”或“随便吃”。小卖部五彩缤纷的零食、快餐店的高温油炸食物、街边小摊贩的诱人小吃等等，都是孩子们不健康饮食的来源。甚至，有时家中的餐桌也存在隐患，营养缺乏、营养过剩、食物搭配不合理……这就需要家长和教师、学校管理者都了解一些营养饮食的相关知识，用孩子能够接收的方式进行正确引导，烹饪出能够激发孩子们食欲的健康饮食，而不是一味地说教“这个不许吃，那个必须吃”。要知道，心情不好，可是会影响消化吸收的。
对孩子们来说，“食育”应该变成一件“好玩”“好吃”的事儿。家长或老师应尽一切可能把饮食教育变得有趣和生动，带着孩子们一起认识食物、了解食物、热爱食物、制作食物，令孩子们更加珍惜食物，热爱生活，感恩大自然，健康快乐地成长。同时，我们也可以在饮食中培养孩子建立正确的人生观。在向儿童介绍各种食物的来源和制作方法时，便可结合这些食物的特点让孩子意识到劳动的概念。当然，让他们参与食物的制作，更能加深对“有劳动才有收获”的体会。
目前，我国少年儿童面临营养不良和营养失衡的双重挑战，除了个别贫困地区存在食物不足现象外，对营养的重要性认识不够、营养意识差、知识缺乏以及不健康的饮食行为和生活方式，是引起营养不良和营养失衡的重要原因。所以，我们需要将饮食健康作为素质教育中的一个重要组成部分，将饮食教育纳入教育体系中。目前，上海市已将食育课在一些中小学作为试点课程展开，进行食品安全教育、营养卫生教育等。根据学生的年龄和特点制定符合其年龄层的教案，力图通过活泼易懂的形式让孩子在“玩乐”中“学习”，加强对营养知识的接受和理解。
笔者作为一名普通的营养工作者，在2014年了解到并参与了食育工作。令我印象最为深刻的是，在2016年12月31日，北京青少年食育实践基地面向陶然亭小学和复兴门小学两所学校举办的食育活动。近80名拥有专业知识背景的志愿者老师参与其中，面向全校的数百名同学开展食育活动。我和其他老师们一道，利用幻灯片和现场制作美食的方式，向孩子们介绍食物的基本属性、生长周期、营养特点以及做法吃法。给大家分发了围裙、制作工具、食材原料，由班主任协助维持秩序，在志愿者老师的带领下一起做了一道营养菜。孩子们的参与热情十分高，理解了在家中默默做饭的“后勤部长”的不容易，也明白了食材合理搭配对于身体健康的重要性。
任何事情都有一个循序渐进的过程，我们明白不可能通过某一次的活动而让“食育”掀起多大的影响力。而且，个人的力量也是微乎其微的。食育的核心目的是改善大众不正确的营养认知和饮食结构，最终使大家养成健康、规律的饮食习惯和正确的生活方式，提高人民的生活质量和健康素养，远离疾病困扰，拥有一个健康的身体和心灵。想要实现这样的目标，需要全社会各界的重视与共同努力，制定并实施有针对性的、持续的、全面的、长久的计划。
食育的内容说简单无外乎是每天吃什么，说复杂则涵盖食物、营养、安全、健康、饮食、疾病预防等多学科知识。作为家长，我们可以通过怎样的方式充实自己的相关知识，培养孩子建立科学合理的膳食行为习惯呢？
1.您可以通过网络查找相关资料，例如一些知名专家学者发表的关于青少年饮食健康的文章。但同时也需要擦亮眼睛，不要被一些以营销为目的的所谓“专家”的“软文”所欺骗。可以多看看，多比较比较对于同一问题，不同专家的说法。
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草本工坊
